Bioinformatics의 프로토콜,DNARNA단백질Proteomics
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진실에서 가장 작은 탈선은 늦게 곱된다. ~Aristotle(384-322BCE) 그리스 철학자.
표정의 역학 범위에 단백질의 다른 유형의 수천을 이루어져 있기 위하여 세포의 단백질 함량은 견적된다. 현재 사용되고 있는 기술은 단백질 성분의 복구, 이 아주 복잡한 혼합물의 분별법, 각 분리하고 고립시킨 종의 효소 단백질 분해, 광대한 대량spectrometric분석 및 마지막으로 알고있은 단백질 예기한 게놈 표정 제품의 데이타베이스향하여 생성되는 구조상 데이터를 일치하기 관련시킨다.
이 절차는 1을 사용하여 첫 걸음 또는 2 차원 전기 이동법 (DE)을 관련시킨다. 1-DE을 사용하여, 단백질은 분자 질량을 기초로 하여 분리한다; 기술은 재생 가능하 단백질을 위해 10300kDa의 대량 범위안에–사용될 수 있고, 그러나 결의안을 제한했다. 더 복잡한 단백질 혼합물의 별거를 위해,2-DE은 좋아한 방법 이다. 이것은, 제 2 차원안에, 등전자 초점을 맞춘 단계에 의하여 그들의 알짜 전하에 따르면 단백질을 첫째로 나트륨 높은 별거eciency을 주는dodecyl황산염 슬fXX어-볼XXry람이d어 젤 전기 이동법 (SDS-PAGE)을 채택하는 그들의 분자 질량에 따르면 그때 분리한 관련시키고.
질량 분석 (Ms)은 분리한 단백질의 식별을 위해 선택의 방법, 및2-DE및 질량 분석 지금 대표한다 몇 천개의 단백질이 자동화한 유행안에 분리하, 검출하, 확인될 수 있는 기술을 이다.
Proteomics방법론은 펩티드 파편의 혼합물을 열매를 산출하기 위하여 그때 단백질 가수 분해 소화를 치루는 관심사의 단백질의 절단에의해 따르는 2-DE에의한 단백질 별거 그리고 위치에의해 처음에 행해졌. 펩티드는 펩티드 질량 지문의 분자 질량 결심 그리고 발생을 위해MALDI-MS을 사용하여 질량 분석에의해, 처음에 분석된다. 이 단계에서는 찾는 데이타베이스가 애매한 결과를 가져오면, 더 엄격한 데이타베이스 찾기를 위해 사용되는 순서 정보를 생성하기 위하여 제 2 질량spectrometric분석,ESI-MS/MS은, 이용된다.
단백질 다이제스트 혼합물의 분석에, 펩티드 질량 지도 또는 펩티드 대량 지문은 펩티드 파편의i.e분자 질량 얻는, 질량 스펙트럼에서 판명될 수 있는다. 더 분석을 위해 필요없이 단백질을 성공적으로 확인하기 위하여 데이타베이스를 찾 도록 아미노산 서열이 충분하게 유일하면 대량 정확도 충분하게 높이 이으면 수시로–, 대량 지도는1215이용할 수 있는다. , 그런데, 데이타베이스 찾음것은 애매한 결과에 지도한다 만약에, 그때 순서를, 또는 이 펩티드를 위해 순서 꼬리표로, 있있는 부분열 생성하기 위하여 세로로 연결되는 질량 분석 (MS/MS)의 사용을 관련시키는 더Ms분석은 혼합물안에 각 펩티드에, 연속되 착수한다. 이것은ESI-MS/MS19의 사용에의해 빈번하게 달성되고 출석할지도 모른다 세제 및 소금에서 펩티드를 분리하기 위하여 흔하게 추가 정화 단계는 실행되어야 한다 펩티드 신호의 묽게함을 일으키는 원인이 되는.
펩티드의 분자 질량 및 순서 꼬리표 정보 모두에 찾는 더 데이타베이스는 명백한 단백질 식별에 지도해야 한다.
저작권 분자 역2006년
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