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분자 생물학 - 과학은 인용한다

과학은 무지의 지세 이다. ~OliverWendellHolmes의sr, 의학 수필1883년

분자 생물학 회보!

최근 공개토론 지점

질량 분석

질량 분서계는 무엇 이는가?

질량 분서계는 다른 화학제품에는 다른 질량이 있는다 고 단순한 사실에 기초를 둔다, 무슨 화학제품이 견본안에 출석하는 이것은 결정하는 것이 이고. 뿐만 아니라 이온을 다르게 분석하는 질량 분서계의 많은 유형 있고 그러나 이온의 다른 유형을 일으킨다; 그런데 이온의 경로를 어떻게 해서든지 바꾼것을 그들은 모두 전기와 자기장 사용한다.

1980년대 후반과 1990년대 초동안에, 견본 이온화의 2개의 새로운 방법은 질량 분석을 생물 고분자 물질 분석, 즉ESI38안에 혁명을 겪는 일으키는 원인이 되고전에 십년간에MALDI.39은 다만, 처음으로, 100kDa을 초과하여 단백질의femtomole양의 분자 질량을 측정할 수 있은 질량spectrometric기술,0.01%정확도보다는 수시로 나아지기 위하여, 넓게 단백질 화학자에게 유효하게 되었다. 이 방법은 분석물의 뜻깊은 강직없이 크고, 불안정한 유생분자에서 이온을 형성하기안에 양쪽 성공적 이다. 뿐만 아니라 그들은 양쪽 과민한 기술 이다 그러나 또한 빠른 – Ms과MS/MS모두 순서 스펙트럼은 초안에 취득될 수 있는다. 그들의 많은 다름에 만기가 되는ESI과MALDI은, 무료하 많은 생물 고분자 물질 실험실에는 양쪽 기술에 접근이 있는다.

견본 준비: 2 차원 전기 이동법 및 질량 분석

대량spectrometric기술을 위해 견본 일반의 별거, 격리 및 준비는,2-DE(2-Dimenisional전기 이동법), 단순한 실험안에5000의 다른 단백질많게는 분리할 수 있는 기술을 관련시킨다. 지점에 의하여 변경되는 단백질 (예를들면phosphorylated)과 그들의 무 변경한 동행자사이에 구별하 장군안에,2-DE은3.510–과 구역수색하는 분자 질량의 등전자 점 (pi) 범위안에 단백질을 분리하기의 가능하뿐 아니라 6에서300kDa에. 분리해 하자마자, 단백질 성분은 얼룩이 지는 기술 (예를들면 은 얼룩, 형광성 얼룩,Coomassie파랑)에의해 계시된다 한 번 위치해 젤에서 그때 추출되고. 단백질은 대량spectrometric분석에 유해한 세제의 사용없이 젤에서 쉽게eluted할 수 있지 않는다,; 추가로, 큰 단백질은glycosylation의 이질적 (예를들면 그 결과로) 이것을 가고지 않 그래서 데이타베이스안에 해당 등록에 관련시킬 수 있는 분자 질량을 소유한다. 단백질이 삭제된 젤 조각의 수성 아세토니트릴 세척에의해 소화된 후에 이 장애를 극복하기 위하여는, 도비 단계는 달성된것을 간다. 이것에 의하여 적출 5의 그리고 간행되는것과 같이 또는 작은 수정에 기술되고 널리 쓰는, 트립신을 채택하는 안에 젤 소화 방법을 사용해서 수확량을 생성한다 단백질 식별이 할 수 있는ms양립한 견본이 증가한다. 시스테인 잔류물사이에 존재하는 이황화물 다리를 쪼개고, 막기 위하여 소화 단계는 선택 감소와 알킬화 단계에의해 선행될 수 있는다. 연속적인 효소 소화를 실행하기 위하여 제 2 젤에서 단백질 반점의 절단을 자동화하 도록 로봇식 시스템은, 개발되고MALDI-MS의 위에 견본을 옮기기 위하여 처음Ms분석을 위해 격판덮개를 표적으로 하십시요. 많은 응용를 위해, 안에 젤 소화에서 재기되는 펩티드는 질량 분석에의해 분석의 앞에 농도와 정화를 요구한다 특별하게ESI이 사용되는 이온화 방법 이으면. 역단계 고성능 액체
착색인쇄기 (HPLC)은 이것을 달성하기의 1개의 방법 이다; 끝 다른 방법은ZipTips(소동공) (C18물자에 포장되는 피펫) 또는PorosR2살포의 사용을 물자 (Perseptive생물계) 관련시킨다. 그것의 대폭적인 합격에도 불구하고,2-DE의 제한은 막 단백질 소수성 단백질아울러 아주 작으나 아주 큰 단백질, 아주 신랄한 아주 기본적인 단백질의 배타를, 포함한다. 저것이라고 생각한다
젤 적재한 단백질의 단20%은 구상하, 분석될 수 있는다. 다른 강제는 적재될 수 있는 견본의 총계가 한정된다 고 이어 논-오b서rv앉어을의 일으키는 원인이 된
낮은 농도 단백질에는 또한 저것 일반적으로 사용한 얼룩이 지는 기술 비선형 응답 요인이 있고. 실제로는,2-DE은 견본을 오염하는 각질을 위해 불순을 위해 기회를 제공하는 손으로 하는 취급 단계를 관련시키는 노동 집약형 프로세스 이다. 자동화가 오염 문제를 모두 돕, 분석을 어느 정도까지 속도를 낼 수 있어도, 1개의 제 2 젤은Ms에의한 및 완전할 구조 해석을 위해 대략 1 달을 완료하기 위하여 일 걸릴 것이다.

양자택일 단백질 분리 기술

대안은 발달의 밑에, 단백질 준비의ms양립한 방법 있는다 그러나 아무도 기술은 보편적인 보충으로 나왔다. 이 방법은 일반적으로 그것으로 예비적인Ms분석을 위해 시각이 걸리는 견본 준비 단계 그리고 필요를 삭제하는MS/MS분석에 단백질 견본을 직접적으로 조화시킨것을 조준한다. 모세관에게 등전자 초점을 맞춤 (더 중대한 펩티드 별거가MS/MS분석보다 전에 바람직하면2DE과 이것에 대안이 다차원 착색인쇄기의 위에 지도하는 때 크기 배타 착색인쇄기Ms이 따르는CIEF)-MS과 준비에게 등전자 초점을 맞춤것은 별거effciency, 최고 수용량, 정밀도 및 계속 강건함의 점에서2-DE에 비교한 충분히 이는 이전 나타나기에 방법, 호의를 베풀는alternative.The지시한다 온라인의, 역단계 고성능 액체 착색인쇄기을 사용하여 단백질의 혼합물에서 복잡한 펩티드 혼합물의 분석을 이다 (HPLC)-MS/MS은 성공적으로 사용되었다. 2차원 착색인쇄기의 보기는 역단계HPLC에의해 따르는 역단계HPLC과 크기 배타 착색인쇄기에의해 따르는 음이온 또는 양이온 교환을 포함한다. 또 다른 한개는, 양자 택일 접근 계속 총계 단백질 트립신 다이제스트의 분석을 위해ESIMS/MS에 결합되는 모세관electrophoresis(CE)와 함께 결합한solid-phase마이크로 적출을 이용하는 이다. 이 방법은 펩티드 파편의 고해상 별거를 주어 이 특별한 효모 리보솜 복합물–안에 단백질의8090%의 식별을 허용한. microfluidicMs에게 장치를 결합함것은 청초하게 선택 단백질 분별법을 위해nanoeSIMsanalysis.A다른 접근에 조화시키기아울러 견본 취급 그리고 별거를 결합하는 더 전략, 이고 식별은MALDI-MS에의해 그때 분석되는 단백질의 명확한 종류를 붙잡기 위하여 항체 화학으로 변경한 표면을 사용하여 지상 붙잡음 방법을 채택하는ProteinChip기술 (Ciphergen)을 사용한다. 표면으로 있있던 이 기술은 레이저 탈착 이온화를 강화했다 (SELDI)-MS35은, 다른 견본의 단백질 함량의 비교를 위해 중대한 가능성으로 가지고있n다.

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