Bioinformatics의 프로토콜,DNARNA단백질Proteomics
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나가 하고 있는 것을 나가 모를 때 연구는 나가 하고 있는 것 이다. ~Wernher폰Braun
Transfection이 사이트는DNA플라스미드 선그림에 세포,RNAsiRNA또는RNAi,또는 재조합형 단백질의transfection에 관련시키는 모든 것을 위해 너의 문 이다. 우리는 세포transfection을 위해 모든 백그라운드 정보에 궁극적인 전문가가 되기 위하여 너를, 프로토콜, 최적화와 분석 단계, 및 세포transfection분쟁 해결 정보 제공한다!
Transfection은 바이러스 선그림을 사용하여 진핵 세포로 외국 물자의 소개 또는 이동의 다른 수단을 기술한다.
균류, 조류 및 식물을 위해 박테리아 그리고 무 동물 진핵 세포안에 무 바이러스성DNA이동을 기술하는 위하여 기간 전이는 좋아하는 그러나, 무 바이러스성 방법을 위해 기간transfection은 수시로 이용한 에 관하여 포유류 세포 이다.
물자의 통풍관을 허용하기 위하여 동물성 세포의Transfection은 전형적으로, 세포 플라스마 막안에 일시적인 숨구멍 또는'구멍을 열n 관련시킨다. 유전 물질 ( 플라스미드DNA또는siRNA구조물을supercoiled),또는 항체같은 단백질은,transfected그렇을지도 모른다. electroporation에 더하여,transfection은 물자에 양이온 지질을 섞어서 세포 플라스마 막에 융합하고 그들의 화물을 안쪽으로 예금하는 리포솜을 생성하기 위하여 실행될 수 있는다.
transfection의 원래의 뜻은 감염의 결과로 세포로'전이에 의하여 감염', 진핵생물 바이러스에게서DNA(RNA) 또는 살균소의i.e소개, 이었다. 기간 전이에는 동물성 세포 생물학 (문화안에 유전 변화 장기 번식을, 또는 암세포의 전형 재산의 취득안에 다른 감이 허용한) 있었기 때문에, 기간transfection은, 동물성 세포를 위해,DNAby.introduction.of일으키는 원인이 된 세포 재산안에 변화의 그것의 현재 의미를 취득했다.
Transfection은 실험적인DNA이 경작한 포유류 세포로 둘 수 있는 방법 이다. 그런 실험은DNA이 내색될 시험하기 위하여 코딩 순서와 통제 지구 (발기인,etc.)을 포함하는 복제한DNA을 사용하여 흔하게 실행된다. 복제하기DNA이 (예컨대, 발기인에 단백질 의무 사이트는 바꾸나 제거될 수 있는다) 광대하게 변경되기 수 있기 때문에,transfection은 유전자의 기능이 특별한 수정에 의하여 영향을 미친다 시험하기 위하여 수시로 이용된다.
Transfection도표:
실험실안에RNA을 종합하는 능력은 많은 기술에 긴요하다. 방사선과 무 방사선RNA조사는 많은 프로토콜을 위해 요구하, 소규모 시험관 내 녹음방송 반응안에 쉽게 종합될 수 있어 오점 교잡과 늦러앗어 보호 분석실험안에 그들의 사용을 허용한.
시험관 내 녹음방송은 발기인, r이b온읒러XX이d어 3인산염,DTT과 마그네슘을 포함하는 버퍼 시스템을 포함하는 순화한 선형DNA템플렛을 요구한다
시험관 내 녹음방송은 발기인, r이b온읒러XX이d어 3인산염,DTT과 마그네슘을 포함하는 버퍼 시스템을 포함하는 순화한 선형DNA템플렛을 요구한다
진핵 세포로 외국DNA을 도입하기의 각종 방법 있는다. 많은 물자는 3개의 종류로 분할될 수 있는transfection을 위해 운반대로 이용했다,: (양이온) 중합체, 리포솜 및nanoparticles.
가장 싸 (과 가장 작은 견실한 원래F.L.Graham과 필요로 하는1973[citation안에A.J.v안 d어rEb이 발견하는 칼슘 인산염옆에) 방법의 한개transfection, 이다](또한[1]보십시요). 인산염 이온을 포함하는hEPES부드럽게 한 염분 해결책 (HeBS)은 이기 위하여DNA을 포함하는 칼슘 염화물 해결책에transfected결합된다. 2개이 결합될 경우,positively-charged칼슘 및negatively-charged인산염의 정밀한 침전물은 그것의 표면에 형성해, 이기 위하여DNA을transfected묶는. 침전물의 현탁액은 세포에 이기 위하여 그때transfected추가된다 (흔하게 단층안에 성장하는 세포 배양). 전체로 이해하는 프로세스에 의하여, 세포는 침전물의, 그리고 그것 의DNA에 어떤을 채택한다.
DNA을 묶, 세포로 얻기 위하여 다른 방법은 높게 분기한 유기화합물, 소위dendrimers을, 이용한다. 아주 능률적인 방법은 리포솜,i.e여러가지로 세포의 구조에 유사하 세포막에 실제적으로 융합할 수 있는 세포로DNA을 풀어 놓는 작은, 막 도약한 몸안에 이을 것이다DNA의 포함transfected이다. 진핵 세포를 위해, 세포가 더 과민하기 때문에, 지질 양이온은 기초를 둔transfection전형적으로 이용한다.
다른 방법은 DEAE 덱스트런polyethylenimine 양이온 중합체의 사용 이다. negatively-chargedDNA은polycation에 묶고 복합물은endocytosis경유 세포에의해 채택되었다.
transfection에 직접 접근은 곳에DNA이 표적 세포 핵으로 그때 직접적으로 "쏘는" 비활성 고체 (일반적으로 금)의nanoparticle에 결합되는 유전자 전자총 이다. DNA은 운반대로 바이러스을 사용하여 세포로 또한 도입될 수 있는다. 그런 경우에는, 기술은 바이러스성 변환이라고 부르고, 세포는 변환시켜 흔히 말한다.
transfection의 다른 방법은Lipofectaminenucleofection,electroporation, 열 충격,magnetofection및 소유transfection시약,DojindoHilymax,Fugene,jetPEI,Effectene또는DreamFect포함한다.
transfection의 가장 큰 응용를 위해, 유전자를 단 일시적으로 내색되면transfected충분하다. transfection프로세스안에 도입되기DNA이 핵 게놈으로 흔하게 삽입하지 않기 때문에, 세포가 유사분열을 겪을 때 외국DNA은 후기에 잃는다. 세포의 게놈안에 원한 고transfected유전자 실제적으로 남아 있으면 이고 그것의 딸 세포가, 안정되어 있는transfection생겨야 하면.
이것을 달성하기 위하여는, 다른 유전자는 세포에게 약간 선택 이점을 주는, 어느 독소로 저항cotransfected이다. 의 어떤은 (아주 몇몇) 그들의 게놈으로 세포를, 우연히, 삽입할 것이다 외국 유전 물질을transfected. 증식하cotransfected유전자가 저항을 제안하는, 독소가 세포 배양에 그때 추가되면, 그들의 게놈으로 삽입된 외국 유전자에 그 몇몇 세포가 다만, 다른 세포는 죽는 그러나. 이 선택 압력을 얼마 동안 가하기다음에, 안정되어 있는transfection에 단 세포는 남아 있고 더 경작될 수 있는다.
안정되어 있는transfection을 위해 일반적인 에이전트는 또한 네오마이신 저항하는 유전자의 제품에의해 중화할 수 있는 독소 이는G418으로 있있는Geneticin, 이다.
시험관 내 녹음방송은 발기인, r이b온읒러XX이d어 3인산염,DTT과 마그네슘을 포함하는 버퍼 시스템을 포함하는 순화한 선형DNA템플렛을 요구한다
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