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과학은 무지의 지세 이다. ~OliverWendellHolmes의sr, 의학 수필1883년

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최근 공개토론 지점

 

Polyclonal항체

전부polyclonal항체에 관하여.

Polyclonal항체는 외부 자원 - 프로토콜을 관련시켰다:

Polyclonal항체 에 더를 위해 또한 방문 항체 역. 항체 및 프로토콜에 관하여 항체 공급자를 목록으로 만들는 새로운 사이트, 배운다 이다.

Polyclonal항체는 의정서를 작성한다:

Polyclonal항체

 

Polyclonal항체는 혈청안에 발견되는 항체의 혼합물에 유사한 많은b세포 또는b세포 선에서 파생되는 항체 이다.

Polyclonal항체는 그런 까닭에 많은 다른 항체 특이성의 혼합물 이다.

구매되는Polyclonal항체 준비는 동일한 항원에 많은 다른 특이성의 항체의 혼합물 이다.

polyclonal항체가 토끼, 쥐, 산양, 닭, 또는 다른 동물의 면역에 의하여 생성한다. 낫다 실험실 사용법을 위해polyclonal항체를 순화하는것은 그런데, 동물성 혈청은 직접적으로 이용할 수 있는다.

Polyclonal항체 준비

박사에의해 데비드Bowtell프로토콜에 기초를 두는

쥐의 면역:

polyclonal항체의 발생을 위해 쥐를 면역하는 주입은 적어도 2 주의 간격에 격세한게 해야 한다.

계속 뒤에 오는 2개의 보조제는 성공적 이다:

  1. 첫번째 면역 주입를 위해: 15-50으g을 만약에 피하로 주사되는 200의 을 보조제안에 항원 주사하십시요.
  2. 제 2 주입은 2 주 늦게 일어나야 한다; 너는 보조제안에 항원의15-50으g에 그때 밀어주어야 한다. 시간이 허가하면 늦게의 (, 다시 달 밀어주십시요).
  3. 7 에 10 일 늦게 검열을 위해 사용될 것이다 분석실험을 사용하여 쥐와 시험 혈청을 유혈한다. 역가가 다시의 높이 충분히 이지 않으면, 후원 이전 후원다음에 2 주.

정상

혈청 준비:

  1. 모으기다음에, 혈액은60분을 위해 응고하는 허용되어야 한다. 4캜에37캜또는O.N에.
  2. pasteur피펫을 사용하여 관 (둥글게 됨)의 측에서 혈괴를 분리하십시요. 4캜O.N에 혈괴를 두십시요.
  3. 혈청을 분리하기 위하여4캜에 10 분을 위해10000xg에 회전시키십시요.
  4. 혈청은50%에 글리세롤을 추가하기다음에-20캜에 저장될 수 있는다.

단일 클론항체가 원하면, 너가 "좋은"polyclonal및 견실한 검열 방법을 다음 단계에 진행해 달라고 하면 하자마자.

정상

토끼:

토끼는 근본적으로 위에 기술한 대로 면역된다. 주입:

  1. 첫째로Freund's완전한100-200ug/1ml주입안에, 2개의 사이트 (각 어깨에).
  2. 위와 같이 불완전한Freund's안에 늦게의 둘째로 1 달.
  3. 늦게의 블리드 2 주. 다시의 후원 2 주 늦게의 (2+2 주 주기).

정상

 

토끼 (NEUSEELAND백색)안에POLYCLONAL항체의 생산

Dr.Walter스테펜에의해 프로토콜에 기초를 두는.

토끼는 오래 되는 무게와 대략 3 달안에3-4킬로그램 이어야 한다. 토끼의 세 번째에 관하여 여러가지 다른 세포질 분대를 위해 내인성 반대로 각질 항체 그리고immunoactivity을 있으십시요. 이것은 어떤 준 토끼에서 전 면역성이 있는 혈청을 가지고 가기의 중요성을 강조한다.

버퍼와 해결책:

정상

혈청을 얻음:

정상

혈청 (차 방안에 실행되는 4 oC)에서IgG의 염화 황산염 강수:

염화 황산염 강수는IgG공정하게 청정한 조각을 얻는 쉬운 방법 이다.

정상

면역:

정상

참고: Garvey,J.S.,Cremer,N.e., &Sussdorf,DH(1977년)안에: 면역학안에 방법. 선술집. Benjamin/CummingsPublishingCompany. 독서는 한덩어리로 만들n다. pp545

정상

ELISA분석실험을 사용하여Polyclonal항체의 검열

항체 스크린을 위해ELISA프로토콜:

ELISA을 위해 물자:

같奔풩ㅀ³ -96우물DynatechImmulon의 유형 2. (피셔17-0221-199).

캰BS,TBS

캰BS+0.1%Tween20또는TBS+0.1%Tween20.

해결책을 막는 유형v)°=2%BSA(PBS안에. (긴 저장을 위해0.02%아지드를 추가하십시요.)

캞lisa버퍼=2%BSA+PBS(선택 아지드)안에0.1%Tween20.

걷옘年� 항체=양고추냉이 과산화 효소 1을 연결했다

갚誰�=ABTS-100X(Zymed00-2001)1에서

캦RP버퍼: 100mMNa구연산염 pH4.2(490마그네슘 구연산+720마그네슘Na구연산염

dXXydrXX어+50mlH2즁, pH4.2).

갸梔� 과산화물30%(1000X)

정상

Polyclonal항체를 위해ELISA프로토콜

1) 항원의ADSORBTION

아) PBS안에 10ug/ml에 묽게 하는Ag.

b) 각자에Ag해결책의 100개의 을을 잘 추가하십시요.

c) O.N을,4캜에 사란 포장으로 덮어 남겨두십시요.

2) 막음

아) 격판덮개를 거꾸로 하고기 우물을 가볍게 쳐서 세척 해방되는Ag은 말린다.

b) PBS을 각자에 우물 추가하고기 다시 거꾸로 해서 행구기 (사용은 병을 분출한다).

c) 행구기를 두번 반복하십시요.

d) 해결책을 각에 잘 막기의 100개의 을을 추가하고십시요, 방 임시 직원에 1 시간 또는4캜에O.N을 남겨두십시요.

3) 1 차 항체

아) 시험될 것이다 항체를 추가하십시요:

세포의 한모금은 여기저기pipeting서=25의 을, 잘 섞는다 (10 번).

혈청, 앗짇엇=1:100및 희석1/5의serie. 해결책을 막기안에 희석을 하십시요.

b) 방 임시 직원에 1 시간 또는4캜에O.N을 남겨두십시요.

4) 이차 항체

아) 세척 해방되는 항체 4 번에PBS+0.1%Tween20.

b) 모든 우물에 효소에 의하여 연결되는 항체의 100개의 을을 추가하십시요. Elisa버퍼안에 적당한 희석을 하십시요. (전: HRP은2000X이다).

c) 허가 방 임시 직원에 1 시간 또는4캜에O.N.

5) 기질

아) 근해안에Disolve기질.

b) 사용TBS세척 격판덮개 4 번에PBS+0.1%Tween20(AP을 위해PBS의 대신에).

c) 각 우물에 기질의 100개의 을을 추가하십시요.

d) 색깔 발달을 보십시요. 이것은 약간 초에게서20분에게 가지고 갈 수 있었다.

e) 필요로 하는 만약에,4MNaOH의50의 을을 추가해서 반응을 멈추십시요.

f) 정확한 파장에Elisa독자안에 흡수를 읽으십시요 (AP-405nm을 위해HRP시스템416nm을 위해).

정상

Polyclonal항체 공개토론 화제

실
실 제목/포스터 마지막 지점 대답 전망
03-20-200805:43있
izacil 에 의하여 "
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