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研究は私がしているものを私が知らないとき私がしているものである。‾Wernher フォンBraun
Transfection のこの場所はDNA のプラスミッドまたはベクトルの細胞、RNA どうかsiRNA かRNAi 、か組換え蛋白質のtransfection と関連しているすべての事のためのあなたの入口である。私達は細胞のtransfection にすべての基礎的な情報を最終的な専門家になるために、議定書、最適化及び分析のステップ、および細胞のtransfection のトラブルシューテ-ィング情報与える!
Transfection はウイルスのベクトルを使用してeukaryotic 細胞に輸入原料の導入か移動の他の手段を記述する。
非ウイルス方法のための言葉のtransfection は菌類、藻および植物のような細菌そして非動物のeukaryotic 細胞で非ウイルスのDNA の移動を記述するために言葉の変形は好まれるが、について最も頻繁に使用されたmammalian 細胞である。
材料の通風管を許可するために動物の細胞のTransfection は普通細胞血しょう膜の一時的な気孔か' 穴を開けることを含む。遺伝材料(のようなプラスミッドのDNA またはsiRNA の構造物をsupercoiled) 、または抗体のような蛋白質は、transfected そうかもしれない。electroporation に加えて、transfection は材料とカチオンの脂質を混合することによって細胞血しょう膜によって溶け、貨物を中沈殿させるliposomes を作り出すために遂行することができる。
transfection の元の意味は伝染に終って細胞に' 変形による伝染' 、eukaryote のウイルスからのDNA (またはRNA) またはバクテリオファージのすなわち導入、だった。言葉の変形に動物の細胞生物学(文化の遺伝の変更長期伝播を、か癌細胞の典型的な特性の獲得で別の感覚が許可する) あったので、言葉のtransfection は、動物の細胞のために、DNA の導入によって引き起こされた細胞の特性の変更の現在の意味を得た。
Transfection は実験DNA が培養されたmammalian 細胞に入るかもしれない方法である。そのような実験は通常DNA が表現されるどうかテストするためにコーディング順序及び調節領域(促進者、等) を含んでいるクローンとして作られたDNA を使用して行われる。クローンとして作られたDNA が(例えば、促進者の蛋白質の結合場所は変わるか、または取除かれるかもしれない) 広く変更されるかもしれないので、特定の修正が遺伝子の機能に影響を与えるどうかテストするのに頻繁にtransfection が使用されている。
Transfection の図表:
実験室のRNA を総合する機能は多くの技術に重大である。Radiolabeled 及び非non-radiolabeled RNA の調査は多くの議定書に要求され、小規模のインビトロトランスクリプション反作用で容易に総合することができしみの交配及びヌクレアーゼの保護試金の使用を許可する。
インビトロトランスクリプションは促進者、ribonucleotide の三リン酸塩、DTT 及びマグネシウムを含んでいる緩衝システムを含んでいる浄化された線形DNA の型板を要求する
インビトロトランスクリプションは促進者、ribonucleotide の三リン酸塩、DTT 及びマグネシウムを含んでいる緩衝システムを含んでいる浄化された線形DNA の型板を要求する
eukaryotic 細胞に外国のDNA を導入する様々な方法がある。多くの材料は3 種類に分けることができるtransfection のためにキャリアとして使用された、: (カチオンの) ポリマー、liposomes およびnanoparticles 。
最も安い(及び最少の信頼できる最初にF. L. Graham 及び必要とされる1973[citation のA. J. van der Eb が発見するカルシウム隣酸塩によって) 方法の1 つtransfection 、行う] ([ 1 ] また見なさい) 。隣酸塩イオンを含んでいるHEPES 緩衝された塩解決(HeBS) はあるためにDNA を含んでいるカルシウム塩化物の解決とtransfected 結合される。2 つが結合される場合、positively-charged カルシウムおよびnegatively-charged 隣酸塩の良い沈殿物は表面で形作り、あるためにDNA をtransfected 結合する。沈殿物の懸濁液は細胞にあるためにそれからtransfected 加えられる(通常単一層で育つ細胞培養) 。完全に理解されないプロセスによって細胞は沈殿物の、そしてそれのDNA とのいくつかをとる。
DNA を結合し、細胞に入れるのに他の方法は非常に分岐させた有機化合物、いわゆるdendrimers を、使用する。非常に有効な方法はliposomes 、すなわち細胞の構造と同じようなある方法であり、細胞膜によって実際に溶けることができる細胞にDNA を解放する小さい、膜区切られたボディであるDNA の包含transfected である。eukaryotic 細胞の場合、脂質陽イオンは基づくtransfection 普通細胞がより敏感であるので、使用される。
もう一つの方法はDEAE デキストランまたはpolyethylenimine のようなカチオンポリマーの使用である。negatively-charged DNA はpolycation に結合し、複合体はendocytosis による細胞によってとられた。
transfection への直接アプローチはDNA が標的細胞の核心に直接"撃たれる" 不活性の固体(一般に金) のnanoparticle につながれる遺伝子銃である。DNA はまたキャリアとしてウイルスを使用して細胞に導入することができる。そのような場合、技術はウイルスのtransduction と呼ばれ、細胞はtransduced 言われる。
transfection の他の方法はLipofectamine のようなnucleofection が、electroporation 、熱衝撃、magnetofection および専有transfection の試薬、Dojindo Hilymax 、Fugene 、jetPEI 、Effectene またはDreamFect 含まれている。
transfection のほとんどの適用のために、それは遺伝子を一時的に表現されればただtransfected 十分である。transfection プロセスで導入されるDNA が通常核ゲノムに挿入されないので、外国のDNA は後期で細胞が有糸分裂を経るとき失われる。transfected ことそれが細胞のゲノムに望ましい遺伝子実際に残ればであり、娘の細胞が、安定したtransfection 起こらなければならなければ。
これを達成するためには、もう一つの遺伝子は細胞に選択の利点を与えるある毒素の方の抵抗のようなco transfected である。のいくつかは(非常に少数) ゲノムに、チャンスによって、細胞を挿入してしまう外国の遺伝材料をtransfected 。co transfected 遺伝子が抵抗を提供する毒素が細胞培養にそれから加えられれば、ゲノムに挿入された外国の遺伝子が付いているそれらの少数の細胞が増殖できるしかしながら他の細胞は死ぬが。しばらくこの選択圧力を適用した後、安定したtransfection の細胞しか残り、更に耕すことができる。
安定したtransfection のための共通の代理店はまたネオマイシンの抵抗力がある遺伝子のプロダクトによって中和することができる毒素のG418 として知られているGeneticin 、である。
インビトロトランスクリプションは促進者、ribonucleotide の三リン酸塩、DTT 及びマグネシウムを含んでいる緩衝システムを含んでいる浄化された線形DNA の型板を要求する
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