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分子生物学- 科学は引用する
科学は無知の地形である。~Oliver Wendell Holmes のSr 、医学エッセイ1883 年
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siRNA のプロトコル及びRNAi のプロトコル
siRNA のTransfection のプロトコル
siRNA のtransfection のプロトコル: Transfect 6 つの健康な版
- セルが合流する60% のとき最初siRNA の処置を適用しなさい(電圧計との測定のconfluency); 金曜日の水曜日のtransfect の1.5x10^6 セルをめっきしなさい。それぞれのため井戸:
- 2.5 ug のsiRNA を薄くしなさい(20uM はおよそ0.26ug/ul である。100 つのUL の最終的なボリュームへの&養基の6-well 版の1 よくにつき9.62 のUL) 。 U のse の障壁のピペットはひっくり返る。 井戸すべてが同じsiRNA とtransfected あればマスターの組合せを作ることができる。生殖不能のオートクレーブに入れられたプラスチック管のこれをしなさい。
- siRNA のmastermix の1 管につき12 のUL RNAiFect
を(Qiagen は- または他のどのRNA のtransfection の試薬も、製造業者のプロトコルを見る) 追加し、穏やかに混合しなさい。
- siRNA と脂質間の複雑な形成を許可するために室温で15 分の間Incubate 。
- セルからの媒体を吸い出し、それぞれに900ul 新しい媒体をよく追加しなさい。
- siRNA の混合物(1 井戸につき112 のUL) を間、穏やかに渦巻く版drop-wise 追加する。
- 第2 siRNA の処置を上輪郭を描かれるステップに従がって、後で2 日適用しなさい。第2 transfection は興味の遺伝子の減少表現に追加する。
他の siRNA はプロトコルを作成する
またRNAi の私達の siRNA およびページを見なさい