SDS-PAGEのゲルの電気泳動

SDS-PAGEの定義か。

SDS-PAGEは蛋白質をそれに応じて分けるのにサイズによって使用される分子生物学の技術である。 SDS-PAGEはまたDNAおよびRNAの分子を分けることができる。

SDS-PAGEのゲルの電気泳動に於いてのSDSの役割

SDS-PAGEのナトリウムdodecyl硫酸塩のポリアクリルアミドゲルの電気泳動は、電気泳動の移動性(高位蛋白質折りたたみ、posttranslationalの修正および他の要因と同様、ポリペプチドの鎖または分子量の長さの機能)に従って蛋白質を分けるのに生物化学、遺伝学および分子生物学で使用される技術である。

電気泳動は充満に従って分子を分ける: 多くの比率

 電気泳動はまた電気泳動の移動性と呼出される応用電界の影響を受けて混合物の分かれるか、または解決の分子のための技術、である。  電界移動の分解された分子は充満によって定められる速度で、または移行する: 多くの比率。  例えば2つに同じ大容量があり、形づけば、より大きい純充満との1つは電極の方により速く移動する。  小さい分子の分離は、アミノ酸およびヌクレオチドのような、電気泳動の多くの使用の1つである。  この場合、サンプルの小さい低下はフィルターペーパーまたは行なう解決に浸る他の多孔性の基板のストリップで沈殿する。  電界がストリップの端として加えられるとき、行なう解決で分解する小さい分子は充満の大きさに相当して率でストリップに沿って移動する。

SDSポリアクリルアミドのゲルの電気泳動の気孔のサイズ

異なるおよび形にほぼ同一の充満がある多くの蛋白質にか核酸ので: 多くの比率、解決のこれらの高分子の電気泳動は異なった長さの分子のほとんど分離で起因する。  ただし、蛋白質および核酸の正常な分離は液体の解決のよりもむしろさまざまなゲル(水の半固体中断)の電気泳動によって達成することができる。  蛋白質の電気泳動の分離はポリアクリルアミドゲルで最も一般に行われる。  これらのゲルはガラス板のペアの間で半固体マトリックスにpolyacrylamidechainsおよび同時にcross-linkingにacrylamideの単量体の解決の重合によって鎖投げられる。  ゲルの気孔のサイズはポリアクリルアミドおよび架橋結合の試薬の集中の調節によって変えることができる。

蛋白質の混合物が加えられるゲルおよび電流に加えられるとき小さい蛋白質はゲルを通してよりより大きい蛋白質を速く移行する。  動きの率は電界のゲルの気孔のサイズそして強さによって影響を及ぼされる。  非常に架橋結合されたポリアクリルアミドゲルの気孔はかなり小さい。  そのようなゲルは小さい蛋白質およびペプチッドを解決できる大きい蛋白質はそれを通って移動できない。

SDS-PAGEプロシージャ

述べられるように、蛋白質はSDSと蛋白質への縛りが熱の付加が付いている二次および非–の二硫化物の–によってリンクされる第三構造を変化させる陰イオン洗剤混合され。 SDSはまた大容量に比例して各蛋白質に均一否定的な充電を加える。

SDSが分離で使用されなかったら、同じような分子量の蛋白質は充満比率が大容量の相違に原因でゲルで別様に移行する。 蛋白質が電流を使用して分かれて、ゲルのマトリックスのサイズを詳細に調べるので、充満の相違は(大容量に加えて)分離の役割を担う。

SDS-PAGEのための染料の追跡

追跡の染料は蛋白質の解決に実験者が電気泳動の実行の間にゲルを通して蛋白質の解決の進歩を追跡することを可能にするように追加されるかもしれない。

SDS-PAGEのプロトコル