電子顕微鏡検査の映像技術はChromatinのシャープなイメージを明らかにする
電子顕微鏡検査の映像技術はChromatinのシャープなイメージを明らかにする
研究者イリノイ大学はchromatinの構造、染色体を構成する遺伝物質の傷の束および蛋白質のシャープなイメージを堅くもたらす電子顕微鏡の下でイメージ投射セルのための技術を開発した。 調査結果は性質方法で現われた。
科学者はセルの核にこと世紀より多くのために蛋白質、ヒストンのような、パッキングDNAの援助確認した。 ヒト細胞は人間の毛髪の幅領域の1/10のに適合への十分よじれ、巻かれなければならないDNAの2から3メートルを含んでいる。
電子顕微鏡検査のような強力な、高解像の映像技術の使用にもかかわらず、このchromatinのパッキングが発生するメカニズムはミステリーに残る。 密にコイル状のchromatinのファイバーは視覚化し非常ににくく遺伝子発現を許可するために細胞分裂の間にどのようにについて凝縮する、またはアンワインドする確認されるか少しは。
方法の開発で、イリノイのチームは電子顕微鏡検査を使用してイメージ投射セルの主難しさに取り組んだ。 従来の調査は有効な化学薬品が付いているセルを(定着剤と呼出される)顕微鏡の下で見ることのために構造を維持するために「修復する」。 しかし標準固定方法はイメージ投射プロセスで別のステップと干渉する: セルの主要部分を分類する付けられた抗体の使用。
セルの特定の蛋白質へのターゲットそしてラッチが光学顕微鏡検査の検出のための蛍光ラベルと、付けることができるまたは電子顕微鏡検査のための金属の粒子(金、この場合)が付いているこれらの抗体。
「セルを最初に修復すれば、これらのimmunochemical反作用の効率の劇的な低下を」、有するセルおよび進化の生物学の部門のイゴールKireev、訪問の科学者およびペーパーの主執筆者を言った。 アンドリューBelmontおよびイゴールKireevの画像礼儀を拡大する電子顕微鏡検査の画像クリックの写真は分類された抗体--に新しい技術生きているセル、電子顕微鏡検査のための大いにより強いシグナルをもたらすアプローチをさらす。
「ターゲットが内部凝縮させたchromatinなら、抗体にあり、突き通る方法が」。
抗体と汚れる前のセルを修復するかわりに、研究者は分類された抗体--に最初に生きている動物のセルをさらした。 これは抗体がchromatinの構造により深く突き通るようにし興味の領域に付着する金の粒子の番号を後押しした。 シグナルは銀製の解決の追加によって(凝固させる)金が付いている接触に沈殿させてこと高められた。
「私達はchromatinの構造に興味がある、従って私達のターゲットは大抵chromatin区切る蛋白質をあると」、Kireevは言った。
研究者は染色体にラックオペレータと呼出された細菌DNAの複数のコピーを挿入した。 細菌蛋白質、ラックのリプレッサーは生きているセルのラックオペレータに、認識し、結合する。
研究者は青いライトの下で緑を蛍光を発する別の蛋白質とラックのリプレッサー蛋白質を結合した。 この設計された蛋白質はラックオペレータシーケンスを含んでいる領域の染色体に付着した。 青いライトの下で、これらの領域は蛍光を発した。 緑の蛍光蛋白質(GFP)に対して目標とされた金付けられた抗体は銀と後押しできる金属シグナルを追加した生きているセルの核にそれからmicroinjected。
「すべて結合されるこれは私達に大いによりよいシグナルを与えると、大いにより強いシグナルは、最もよい構造保存と」、Kireev言った。
蛍光を発する蛋白質は研究者がセルの興味の領域を見つけるのを助けた。 これらの領域はそれから電子顕微鏡検査のために分類され、目標とされた「immunogold」だった。
生じる顕微鏡写真で研究者は染色体の高められた汚損を見た。
「私達は高リゾリューションで調査にセル細胞質の多くの異なったGFP付けられた蛋白質今この同じ住セル分類方法を適用してもいいまたは核」、アンドリューBelmontをペーパーのセルそして進化の生物学および年長の著者の教授言った。
「染色体、人々を理解することを試みることで光学顕微鏡検査を使用して特定の染色体蛋白質の低分解能の視覚化に主として限定されたと」、Belmostは言った。 「これは皆が本当らしい」。ものをの複製およびトランスクリプションのようなDNA機能を遂行する複雑にされた染色体の構造であるために事がどのようにの組立てられるか漫画モデル不明瞭に多くの場合導く多くの推測をしなければならなかったことを意味した
「今私達は私達が単に見てもいく、実質の構造を電子顕微鏡検査のを使用してもっとより十倍に見るためにより高い解像度」、Belmontが言ったことを望む。 私達が私達の新しい方法を使用して」見つけるものを見るために「私達は実際に刺激される
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