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版権2007年-分子端末
分かれ、質的に隔離されるサンプルからRNAの品質を査定するのに長年に渡ってRNAのゲルが使用されていた。 チェックアウトはどんなRNAであるか確実でなければ:
音声は
詳しいRNAの説明を聞く! そして私達のRNA百科事典の記事を見なさい。
RNAのサンプルの隔離の後で、隔離されたRNAの準備の品質は通常変化のagaroseのゲルの電気泳動によって査定される。 結果が主に質的であるが、RNAの収穫についての情報をまた手に入れることができる。
RNAがそれ自身に折り、分子内に基礎に組み合わせることによって広範な、安定した二次構造を形作りがちであるのでゲルを変化させて使用される。 RNAのこの二次構造はそれがサイズに従って主に移行することを防ぐ。
あなたが問題はゲルにまたはあなたが分析しているRNAとの問題だったかどうか定めることができる珍しい結果を得ることゲルのRNA肯定的な制御を含んでいるケースでことを、確かめなさい。 またそのままであるためにRNAの分子量のマーカー、知られているRNAのサンプルを使用できるまたは両方とも、このために使用することができる。
RNAのゲルは汚れるethidium臭化物とethidium臭化物がRNAの分子の二次構造の間で挿入し、RNAが紫外線の下で見られるようにすると同時に視覚化される。
RNAはゲルの電気泳動(通常agaroseのゲルの電気泳動)で分かれている。 RNAのゲルを実行した後プローブとの膜、交配、および最終的に検出へのそれに続く転送の北のしみを行なうことができる。 または単に(そして大いにより速い)、ethidium臭化物を使用してRNAのための汚れかSYBR (または同じような染料-それとして無毒、より安全があるよりよい)。
北のしみが完了してがRNAのゲルおよびリアルタイムPCRより大いに退屈であるので、RNAのゲル程に多く使用されない。
RNAのゲルの電気泳動および変化は分子生物学の研究で使用される:
RNAのゲルの電気泳動の使用の不利な点は下記のものを含んでいる:
RNAのゲルの利点は下記のものを含んでいる:
RNAの保全を確認するためには「北のしみ」の分析をするべきである。 これを達成するためには変化のゲルを実行しなければならない。
RNAの使用のミディゲルへの小型ゲルのため: 50のmL100mLを作りなさい
メガゲルのために400のmLを作りなさい。
100mLゲルのために(最も一般に動作する) 1%のagaroseの解決をするためにagaroseの1gを追加する必要がある。
| 準備するため: | 500mls | 750のmls | 1.5リットル |
1X Eバッファ(50X) -次 |
10のmL | 15のmL | 30のmL |
| 0.66Mのホルムアルデヒド(Vol.の1/19年) | 26.3 mL | 39.5 mL | 79のmL |
次を追加しなさい:
追加しなさい:
品質を査定するためにRNAのagaroseのゲルを常に実行しなさい。 紫外線分光測光の結果だけ頼るただ。
*すべてのステップのための使用のDEPCによって扱われる水そして焼かれたガラス製品。 突進にあればバッファが自由にRnaseであるMiliporeによって浄化される水を使用しなければ。 Rnaseはどこでもある! 摩耗の手袋は、焼かれたガラス製品、か無穿孔プラスチックだけ使用する。 DePCの御馳走水、バッファ(Trisを除いて)。 非常に注意しなさい。
現在RNAを実行するための好まれる方法を有したら、それを使用し続けなさい。
RNAのプロトコルフォーラムのRNAのゲルについての論議し、ポストの問題または質問。
