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分子生物学Blog

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RNA はゼリー状になる

版権2007 年- 分子端末

 

RNA のゲルの電気泳動の歴史

分かれ、質的に隔離されるサンプルからRNA の品質を査定するのに長年に渡ってRNA のゲルが使用されていた。チェックアウトはどんなRNA であるか確実でなければ:

可聴周波 詳しいRNA の説明を聞きなさい! そして私達のRNA 百科事典の 記事を見なさい。

RNA のゲルの電気泳動- 基礎的な情報

RNA のサンプルの分離の後で、隔離されたRNA の準備の品質は通常変化のagarose のゲルの電気泳動によって査定される。結果が主に質的であるが、またRNA の収穫についての情報を手に入れることができる。

RNA がそれ自身に折り、分子内に基礎に組み合わせることによる広汎な、安定した二次構造を形作りがちであるのでゲルを変化させて使用される。RNA のこの二次構造はそれがサイズに従って主に移行することを防ぐ。

あなたが問題はゲルとまたはあなたが分析しているRNA との問題だったどうか定めることができる珍しい結果を得ることゲルのRNA 肯定的な制御を含んでいるケースでことを、確かめなさい。またそのままであるとRNA の分子量のマーカー、知られているRNA のサンプルを使用できるまたは両方ともこの目的に、使用することができる。

RNA のゲルは汚れるethidium 臭化物とethidium 臭化物がRNA の分子の二次構造の間で挿入し、RNA が紫外線の下で見られるようにすると同時に視覚化される。

RNA はゲルの電気泳動(通常 agarose のゲルの 電気泳動) によって分かれている。RNA のゲルをランした後プローブとの膜、交配、および最終的に検出へのそれに続く転送の北のしみを行なうことができる。または単に(そして大いにより速い) 、ethidium 臭化物を使用してRNA のための汚れかSYBR (または同じような染料- それとして無毒、より安全があるよりよい) 。

 

RNA のアプリケーションはゼリー状になる

北のしみが完了してがRNA のゲル及び実時間PCR より大いに退屈であるので、RNA のゲル程に多く使用されない。

RNA のゲルの電気泳動および変化は分子生物学の研究で使用される:

• RNA を検出しなさい
• 隔離されるRNA の品質のための試金
• RNA の量または収穫の汎用決定を可能にしなさい
• RNA の劣化のための試金

RNA の不利な点はゼリー状になる

RNA のゲルの電気泳動の使用の不利な点は下記のものを含んでいる:

• RNA のゲルは非常に量的でない。RNA の収穫を正確に定めるか、または標準となることができない。北のしみが付くか、または点のしみのような放射性方法ははるかに正確である。
• RNA を検出するのに頻繁にethidium 臭化物が使用されている。Ethidium 臭化物はmutagenic 及び有毒であるのでbiohazard である。
• しかしRNA のゲルは紫外線分光測光か他の方法RNA の収穫の速い決定を速くない可能にする。

RNA の利点はゼリー状になる

RNA のゲルの利点は下記のものを含んでいる:

• それは広く受け入れられた方法である
• RNA のゲルは行い非常に速く、易い
• 1-2 時間以内のRNA の品質のために試金できる
• SYBR か別の無毒な汚れ(すなわちEthidium 臭化物を使用しない) を使用すれば、RNA のゲルはかなり安全である。

RNA のゲルのプロトコル

RNA の保全を 確認するためには "北のしみ" の分析を するべきである。これを達成するためには変化のゲルをランしなければならない。

RNA の使用のミディゲルへの小型ゲルのため: 50 ML 100mL を作りなさい

メガゲルのために400 ML を作りなさい。

 

一般にランされる100mL ゲルのために1% のagarose の解決をするために() agarose の1g を追加する必要がある。

 

RNA のための連続したバッファ調理法はゼリー状になる

準備するため:	500mls	750 のmls	1.5 リットル
1X E バッファ(50X) の下で	10 ML	15 ML	30 ML
0.66M のホルムアルデヒド(Vol. の1/19 年)	26.3 ML	39.5 ML	79 ML

試薬を変化させるRNA

試薬を変化させるRNA の400ul を準備するため:

次を追加しなさい:

• 80% は300ul をForamide 脱イオンした
• ホルムアルデヒド3.7 % の40 のUL
• 1X 50X E バッファ8 UL
• dH2.O = 400ul 52.ul

1 リットル毎の50 のX E バッファ

追加しなさい:

• 0.9 M Na2 HPO4 二塩基の127.8 g
• 0.1M NaH2PO4 一塩基13.8 年のg

プロトコル: RNA のゲルの準備のステップ

1. 解決にagarose を置きなさい。
2. ティッシュ差し込まれたフラスコの準備された解決を熱しなさい
3. 60.C に涼しい許可しなさい
4. 同輩にホルムアルデヒドを2.7 ML 4.0 5.3 21.2 0.66M 追加しなさい
5. フラスコにそれを使用すれば) (Ethidium 臭化物を追加しなさい
6. 可能なら) ゲルを注ぎなさい(フードで。
7. RNA の2 ug を10 min. の75.C で熱しなさい、そして速く冷却しなさい(これはRNA が単一座礁させて変化し、とどまるようにする) 。
8. 追加しなさい: 試薬を変化させるRNA の2.5 のVol.
9. サンプルにローディングの染料の1/10 のVol. を追加しなさい。
10. agarose のゲルの井戸にサンプルをロードしなさい。
11. 30minutes-2 時間ゲルを(通常100V ボルト) ランしなさい。(染料のマーカーを使用してランする点検のRNA)

RNA のためのヒントはゼリー状になる

常に品質を査定するためにRNA のagarose のゲルをランしなさい。紫外線分光測光の結果しか頼らないただ。

* すべてのステップのための使用のDEPC によって扱われる水そして焼かれたガラス製品。に突進ならバッファがRnase 自由にであるMilipore によって浄化される水を使用しなければ。Rnase はどこでもある! 摩耗の手袋は、焼かれたガラス製品、か無穿孔プラスチックしか使用しない。DePC の御馳走水、バッファ(Tris を除いて) 。非常に注意しなさい。

 

トラブルシューテ-ィングのRNA はゼリー状になる

現在RNA をランする為の好まれた方法を有したら、それを使用し続けなさい。

RNA のプロトコルフォーラムのRNA のゲルについての論議し、�&ストの 問題または質問。

RNA のゲルの参照