実時間PCR

実時間PCRは単一セルからタイプのセルの人口からのサンプルのcDNAまたはmRNAの量を、(ティッシュか細胞培養)測定する、または最近均等になるである量的なPCR。 リアルタイムが遺伝子のmRNAの表現を定めるのに一般に使用され表現は(mRNAの限定番号)水平になるある特定の状態の間に(薬剤とセルを扱うことのような)。  実時間PCRが病因と発生する表現の変更に関して考えを与える病気のサンプルと正常な(制御)サンプルを比較するのに使用することができる。  感度のための実時間PCRはまたウイルスのような血の病原体の検出で使用される。

従って実時間量的なPCRの開発は従来量的なPCRと関連付けられる可変性を割り当てること除去した
PCRプロダクトの定期的な、信頼できるquantitation。

目録

各セルタイプexpressess transcriptomeとして知られている一組のmRNAの分子。  刺激に応じて、セルはこれらの要因のmRNAのレベルの調整によってセルの中の蛋白質の酵素のような要因を調整するか、または調整できる。  mRNAのレベルは蛋白質のレベルに常に関連しない従って注意は一般にmRNAのレベルが蛋白質のレベルに緩く対応するどんなに、必要である。  実時間pcrを使用してセルの中のある特定の要因のmRNAのレベルを測定することはこれらの要因または蛋白質の量に関して糸口を与える方法である。

従来、セルの中のmRNAのレベルは北にしみが付くことを使用して測定された。  この技術は遺伝子expression/mRNAのレベルの測定の金標準と非常に正確な読書を与えるシンチレーション計数装置を使用して量を示されるRNAを分類するのにradiolabeledプローブを使用すると同時にみなされる。 非常に正確が北にしみが付くことに放射能の使用を含む複数の不利な点があった。 北にしみが付くことはmRNAの正確な測定を必要とし、サンプルを比較するためにセルからの総RNAは得た。 これは検出方法が非常に正確だったが、エラーがサンプル(ieのセル処置、異なったティッシュ、異なった動物、等)間の総RNA/mRNAのレベルの相違による北にしみが付くか、に(またはしみが付くRNA点またはスロット)もたらすことができるので問題だった。  それはまた多数のセルを必要とした比較的多量のRNAを必要とした。 最近、mRNAの遺伝子の定量化か実時間pcr方法は放射能の使用を増進され、より行い易くそして必要としない。  研究者に茎セル研究および一次電池の研究のフィールドでセルの少量へのアクセスだけが特にあり頻繁に、実時間pcrは均一からのmRNAのレベルの非常に量を示すことを可能に少数のセルおよび最近単一セルした。  ただし、実時間pcr方法のこの極度な感度は偽の結果をもたらす汚染からサンプルを保護することを重大にする。 実時間pcrが行なわれる前に現在の実時間pcr方法およびシステムはまたmRNAまたはcDNAのサンプル集中の測定を必要としない。

Higuchiとal.1、2はPCRプロダクトをように検出するシステムの構築によってPCRの動力学の分析を開拓した
それらは集まる。 この「実時間」システムは各拡大の反作用にintercalatorのethidium臭化物を含める、
紫外線が付いているサンプルを照射する適応させた熱cyclerおよび生じる蛍光性の検出
コンピューター制御冷却されたccdのカメラを使って。 拡大はdouble-strandedの増加する量を作り出す
ethidium臭化物を結合する蛍光性の増加に終るDNA。 蛍光性の増加の計画によって
サイクル番号対、システムはのより完全な映像を提供する拡大のプロットを作り出す
PCRはサイクルの固定番号の後で試金プロダクト蓄積より処理する。