カルシウム隣酸塩Transfection はプロトコルを作成する

このカルシウム隣酸塩transfection 方法は1) 非常に変形させてである及び2) 、SAOS2 、AdAH 、NPC-KT はセルラインによってヒーラ、U2.OS 被着剤最もよく働くセルラインで(及び20% から100% 年をからtransfection の効率得る) 。よの作業は議論に次に基づく実験のデザインそして解釈で一時的な実験しかし注意のために使用されるべきである。また安定したセルラインを生成する為にとてもよく働く。この方法は入力プラスミッドの量にかなり敏感である。- [カルシウム 隣酸塩Transfection 読まれた方法]

このプロトコルはGraham 及びvan der Eb (1973 年) のりっぱな方法に、基づいている。の統合されたコピーを染色体に関して運ぶセルの安定したラインを生成するのにプロシージャがtransfected DNA を主に使用されている。- [Genomic の 高分子量のDNA が付いているセルの読まれたカルシウム隣酸塩仲介されたTransfection]

カルシウム隣酸塩はDNA が付いている不溶解性の沈殿物を形作る、セル表面に接続し、セルにendocytosis によって運ばれる。プロトコルは付着性及びnonadherent 他のタイプのセルとの使用のために容易に、合わせられる。このプロトコルはヨルダンによって等出版される方法の修正されたバージョン(1996 年の) だれ中国のハムスターの卵巣のセルのための厳格に最適化されたカルシウム隣酸塩基づかせていたtransfection 方法および293 人間の萌芽期の腎臓のセルのラインである。- [プラスミッド DNAs が付いているEukaryotic セルの読まれたカルシウム隣酸塩仲介されたTransfection]

このプロトコルは一次ニューロンにGFP 付けられたアクチンを表現する為の2 つのtransfection 方法を記述する。診断脂質の試薬DOTAP (Roche の) 方法は文化の長期の間によく存続するhippocampal ニューロンをアクチンGFP 表現することを発声する。カルシウム隣酸塩方法はずっとcoverslips で既に試験管内で育っているtransfect ニューロンに使用することができる。イメージ投射のために適したTransfected のセルは文化で15 日まで試験管内で得ることができる。- [ アクチンGFP プラスミッドが付いているHippocampal 読まれたTransfecting によって培養されるニューロン]

このプロトコルはDNA/calcium 隣酸塩(CaPO4) coprecipitation を使用して一次hippocampal ニューロンにプラスミッドのDNA のtransfection を記述する。transfection 媒体の精密なpH およびcoprecipitate が付いているセルの孵化の時は再生可能で、有効なtransfection のために重大である。これらのパラメータがある特定のプラスミッドのために最適化されれば、方法は他の確立されたセルラインのtransfection のために容易に合わせられる。- [カルシウム 隣酸塩Coprecipitation を使用してプラスミッドのDNA が付いているHippocampal ニューロンの読まれたTransfection]