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カテゴリ: ウイルスの処理のプロトコル: M13バクテリオファージの処理のプロトコル
プロトコルはバクテリオファージM13のrecombinantsを組み立てるために3つの標準的な方法を記述する: (1)単一の制限の酵素とのM13 RFの開裂によって準備される一直線に並べられたベクトルへの挿入DNAを縛ること; M13 RFを使用して一直線に並べられたベクトルの自己ligationを、(3)方向クローニングのための2つの制限の酵素と抑制するアルカリホスファターゼを使用して(2)は裂き。 - [バクテリオファージM13はへの読まれたクローニングはプロトコルを方向を変える]
カテゴリ: DNAのプロトコル: Genomic DNAライブラリプロトコル
この段階は商業キットを使用して哺乳類のベクトルのcDNAライブラリを、組み立てる方法を要約する。 これらのキットは複数の製造業者から使用でき、一般にすべての必須の試薬を含んでいる。 - [構築およびスクリーニングのためのEukaryotic表現のベクトルのcDNAライブラリの読まれた構築]
カテゴリ: DNAのプロトコル: Cosmidライブラリプロトコル
プロトコルは二重Cosサイトのcosmidのベクトルのgenomic DNA、SuperCos-1の35 45kbのフラグメントのライブラリを組み立てる方法を記述する。 ステップは下記のものを含んでいる: SuperCos-1 DNAの線形化そしてdephosphorylation; MboIの高分子量DNAの部分的な消化力; 高分子量のgenomic DNAのDephosphorylation; cosmidのLigationはgenomic DNAに武装する: recombinantsを包み、めっきする; 組換えのcosmidsの隔離そして分析: ライブラリの確認。 - [CosmidのGenomic DNAライブラリの読まれた構築はプロトコルを方向を変える]
カテゴリ: マウスプロトコル: マウス遺伝学のプロトコル
プロトコルは選択方法と同様、ESのセルにDNAをelectroporatingための方法を、記述する。 パイロット・スタディは各DNAの構造物のための条件を最適化するために行われるべきである。 ここに記述されている選択方法は最も複雑のの1つである。 それは細菌のネオマイシン抵抗の遺伝子がマウス遺伝子のコード配列を破壊する構造物を目標とすることを含む。 - [萌芽期の茎(ESの)セルおよび選択方法プロトコル]へのElectroporating読まれたDNA
カテゴリ: 細胞生物学および細胞培養: ESの幹細胞生物学および文化
構造物を目標とすることのES/MEFの細胞培養そしてelectroporation。 ギャリーブラウン- [構造物を目標とすることの読まれたES/MEFの細胞培養そしてelectroporation]
カテゴリ: 細胞生物学および細胞培養: ESの幹細胞生物学および文化: MEFのプロトコルマウス萌芽期の繊維芽細胞
ギャリーブラウン先生。 目標とする構造物のためのelectroporationを使用してES/MEFのセルのElectroporationそしてtransfection。 - [構造物を目標とすることの読まれたES/MEFの細胞培養そしてelectroporation]
カテゴリ: 幹細胞のプロトコル: 幹細胞文化プロトコル
構造物を目標とすることのES/MEFの細胞培養そしてelectroporationのためのプロトコル。 - [構造物のプロトコルを目標とすることの読まれたES/MEFの細胞培養そしてElectroporation]
カテゴリ: 幹細胞のプロトコル: マウス萌芽期の繊維芽細胞のプロトコル
カテゴリ: 一次電池隔離および文化プロトコル: 哺乳類の細胞培養のプロトコル
構造物を目標とすることのES/MEFののためのプロトコル細胞培養そしてelectroporation。 - [構造物のプロトコルを目標とすることの読まれたES/MEFの細胞培養そしてElectroporation]
カテゴリ: マウスプロトコル: マウス細胞培養のプロトコル
プロトコルはtransfected哺乳類セルにクローンとして作られたexonsを表現するために装備されているプラスミッドのベクトル(pSPL3)のgenomic DNAライブラリを組み立て増幅する方法を記述する。 - [ライブラリプロトコルの構築のための読まれたExonの装飾そして拡大]
カテゴリ: Cytoskeletonのプロトコル: アクチンミオシンのプロトコル
セルtransfectionの実験で使用される同じGFP付けられたアクチン構造物がtransgenicマウスを作り出すのに使用されていた。 Transgenic動物は鋭く切られたスライスとしてそのままな動物の、またはorganotypicスライス文化として脳組織のイメージ投射を可能にする。 彼らはまた分散させた低密度の細胞培養の高リゾリューションでイメージ投射ニューロンのためのセルのソースとして役立つ。 ニューロンのアクチンGFP表現のレベルがかなり変わる文化でtransfectedセルと対照をなして、transgenicマウス… - [Transgenicマウス頭脳のプロトコルからのティッシュのスライスの読まれたイメージ投射アクチン]
クローニングとして定期的に使用されるM13の緊張のdouble-stranded DNAの大きい在庫を生成するのに主に使用されるプロトコルが方向を変える。 個々の組換えの多量のsingle-stranded DNAは時折特定のradiolabeledプローブの多くの準備を生成するか、または多数のサイト指示された突然変異体を組み立てる特定の目的のために必要、例えば、かもしれない。 - [Single-strandedおよびDouble-strandedバクテリオファージM13 DNAのプロトコルの読まれた大規模な準備]
カテゴリ: 核酸の浄化のプロトコル: DNAの隔離のプロトコル: Genomic DNAの隔離のプロトコル
プロトコルがgenomicライブラリの構築のために適切なサイズのフラグメントを生成するeukaryotic genomic DNAの制限の酵素の消化力のための条件を確立するのに使用されている。 genomicライブラリを組み立てる、開始のgenomic DNAの平均長さは少なくともベクトルの8倍のべきである容量。 - [Genomicライブラリの使用のためのEukaryotic DNAの読まれた部分的な消化力: 試験反作用のプロトコル]
カテゴリ: プラント生物学のプロトコル: Arabidopsisの遺伝学のプロトコル
エシェリヒア属大腸菌の一致する組み変えのクローニングによるプラント遺伝子の位置の精密工学のためのプロトコル。 下記のものを含んでいる: EL250 RED-HRの位置のレスキューおよび工学プロシージャの主ステップ; プライマーデザインおよびプラスミッドの構造物; AtSTMギャップ修理構造物; 構造物のバックボーンを目標とすること; electrocompetent EL250セルの準備; EL250のrecombinogenic機能のBAC F24o1および誘導の変形; ギャップ修理HR.著BAC F24o1からのAtSTMの位置のレスキュー- [エシェリヒア属大腸菌の一致する組み変えのクローニングによるプラント遺伝子の位置の読まれた精密工学]
カテゴリ: イーストプロトコル: イースト2ハイブリッドシステムプロトコル
プロトコルはLexA細菌の蛋白質に溶けるターゲット蛋白質を表現するプラスミッドの構造物(pBAIT)を生成する方法を記述する。 PBAITはlexAオペレータの管理下で細菌のlacZの遺伝子を運ぶlexAop-lacZレポーターのプラスミッドが付いているイーストにcotransformed。 受信者のイースト緊張はlexAオペレータの管理下で染色体に関して統合されたleu2レポーターの遺伝子を、また含んでいる。 - [読まれた2ハイブリッドシステム段階1: 餌LexAの融合蛋白質のプロトコルの性格描写]
生体外の変換されたXenopus Mosのキナーゼ試金のプロトコル。 プロゲステロンに応じて、未熟なXenopusのoocytesは肥やすことができる卵に成熟する。 Mos蛋白質キナーゼはoocyteの成熟のために必要、多分マップのキナーゼカスケードを作動する機能が原因でである。 このマップのキナーゼカスケードはM段階にCdc2/cyclin Bおよびエントリのアクティブ化の結局原因となる。 このプロトコルでは、付けられたMosのキナーゼはキナーゼ試金で生体外で変換され、immunopurified、そして使用される。
プロトコルは大きいのの構築を記述する(10^10) fUSE5かf88-4緊張の一次任意ペプチッドバクテリオファージライブラリへの10^8。
プロトコルはtransgenicマウスのためのベクトルを目標とすることのデザインのための汎用考察を与える。 プロトコルはノックアウトのそしてベクトルそしてhomologously組み変えられた萌芽期の幹細胞を作り出すための作戦の一部たたのデザインの先端を共有する。
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