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プロトコルはcommissural軸索の指導の分析のためのdsRNA扱われたAvian胚の脊髄を切り裂く方法を記述する。 パラホルムアルデヒドが付いている脊髄の固定の後で、commissural軸索は速いDiIと汚れる。 - [dsRNA扱われたAvian胚のAxonal Pathfindingの分析のための脊髄の読まれた解剖]
プロトコルはdouble-stranded RNA (dsRNA)を持つAvian胚のovoのtransfectionでのための方法を記述する。 dsRNAは胚の脊髄に注入される。 それに続くelectroporationはdsRNAの分子の細胞通風管を促進する。 - [dsRNAの読まれた注入およびAvian胚のプロトコルのElectroporation]
プロトコルは候補者の遺伝子のcDNAsのフラグメントからのdouble-stranded RNA (dsRNA)の生産を記述する。 cDNAのフラグメントは並ぶSP6およびT7促進者が付いているプラスミッドでクローンとして作られなければならない(例えば、pSP72かpCRII)。 プラスミッドは一直線に並べられ、感覚およびantisense RNAsは生体外のトランスクリプションによって別に作り出される。 浄化の後でAvian胚のRNAiのために適したdsRNAの分子をもたらすために、RNAの繊維はアニールされる。 - [Avian胚のプロトコルのRNAiのためのdsRNAの読まれた生産]
プロトコルはneurofilamentsの160-kD亜単位に対して抗体を使用してAvian胚のティッシュのスライスの神経線維を汚すために方法を記述する。 これは制御と実験胚間のモーターそして感覚ニューロンのブランチするパターンの比較を可能にする。 ティッシュはvibratomeまたはティッシュのスライサーを使用して切られたスライスである。 プロトコルは段階33の後でより古い胚のためにおよそ適して、アクセス可能でであってはなりません領域は分析を全取付ける。 - [dsRNA扱われたAvian胚のプロトコルのAxonal Pathfindingの分析のためのティッシュのスライスの読まれた汚損]
プロトコルはneurofilamentsの160-kD亜単位に対して抗体を使用して神経線維を汚すための方法をで全取付けるAvian胚の準備を記述する。 これは制御と実験胚間のモーターそして感覚ニューロンのブランチするパターンの比較を可能にする。 このプロトコルは段階33についてのまで異なった段階の胚を正常に適用された(7日の孵化)。 - [読まれるdsRNA扱われたAvian胚のプロトコルにAxonal Pathfindingの分析のための準備を全取付けなさい]
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