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分子生物学Blog

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除去の西部のしみの膜

西部のしみの膜をここに除去する方法の発見情報。

西部のしみの膜の除去の目録

• 膜は何を除去しているか。
• 背景
• アプリケーション
• 材料
• バッファ
  
• 準備
• プロトコル
• 視覚化
• ゲルの分析
• 西部のしみの除去のビデオ- すぐに来る!
• 他の西部のしみの除去のプロトコル
• トラブルシューテ-ィングの膜の除去
• 除去のための議論のトピックはしみが付く
• 膜の除去のヘルプを得なさい

膜は何を除去しているか。

膜の除去は西部のしみの膜からの抗体の取り外し(を含む一次および二次) 、新しい蛋白質の試金のための新しい一次及び二次抗体の孵化を西部にしみが付くことによって許可するためにである。

 

 

西部のしみの除去のアプリケーション

Agarose のゲルの電気泳動はDNA 及びRNA の分子の分析か分離で主に分離がまた制限の酵素の消化力の後のDNAs の特定のサイズの浄化を可能にするどんなに、(蛋白質がまたagarose のゲルで分けることができるが) 使用される。これは通常agarose のゲルの電気泳動が切られていない物から切口のベクトルを分ける切口のプラスミッドを得るクローンとして作ることで使用される。

従って除去は割り当てる:

1. 別の蛋白質の表現のために試金するべき西部のしみの膜の再使用
2. 全体蛋白質のための試金に
3. 非non-phosphorylated 蛋白質のために試金するため(phosphorylated 蛋白質のための試金の後で) 。

 

 

膜の除去バッファ

除去はオーブンの特別なバッファそして孵化を必要とする。

使用されるバッファ:

除去バッファ

• 62.5 ミリメートルTris-HCl (pH 6.8)
• 2% SDS. (2 ベータmerceptoethanol の280 のUL か0.1 のM 2-Mecaptoethanol の最終的な集中を追加しなさい) 。

除去のプロトコル

• 40 ML μの除去バッファにつき2 ベータ2-beta-mercaptoethanol の280 のl を追加しなさい(100 ミリメートルの最終的な集中に)
• 1. TBST の膜を洗浄しなさい(1 のX 5 分)
  2. 50-60.C で30 分の除去バッファの膜をIncubate (暖房のオーブンをこれのために- 使用し、オーブンのドアを臭いのために閉じておきなさい)
  3. TBST で洗浄しなさい(2 のX 5 分)
  4. 5% の妨害のミルクの1 つのh のための膜を妨げなさい
  5. 西部のしみを開発する為の正常なプロトコルに続きなさい。

 

 

 

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