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蛋白質のアレイキット及びプロダクト

蛋白質のMicroarray の検出方法及び分析

蛋白質及び抗体Microarrays

蛋白質及び抗体チップのための検出方法そして分析

検出方法及び無指定の結合
            アレイへの無指定の結合は最小になる必要があり、これは牛のような血清アルブミン基づかせていたバッファ(BSA) でアレイを(31) 浸すことによって普通される。
            蛋白質のアレイのAnalyte 結合及び保持はプローブに核酸ターゲットの交配と同じような熱力学的に運転された結合メカニズムによって進む。但し、蛋白質へのバインドされたターゲットの検出はDNA のmicroarray 検出(9) のそれよりかなり複雑である。現在色々な検出方法は検査されている。例えばフィルター両方アレイ(66,67) およびガラスのアレイ(68) のための蛋白質を検出するのに、ELISA が最初に使用された。 ELISA によって基づかせている検出方法に多くの偽の陽性をもたらす蛋白質抗体の相互作用の非特定性の不利な点がある。   放射性同位体の分類はGe 等によって使用された。 (22) 、蛋白質蛋白質、蛋白質のDNA–、フィルターアレイ–の蛋白質の薬剤の–相互作用を調査するために分類する放射性同位体。朱等。アレイ(36) の浄化されたイーストキナーゼ蛋白質の使用によって異なった基板のキナーゼ試金を行なうために分類する使用された放射性同位体。検出の好まれた方法はこれらの方法が安全一般にであるので蛍光性の検出、非常に敏感く、簡単いおよび非常に高リゾリューションを持つことができる。これらの検出方法は標準microarray スキャンナーとまた互換性がある。一般に、チップは直接fluorescently 分類された親和性の試薬(例えばstreptavidin) を使用して第2 ステップで(16,56) 検出することができる蛍光分子(付けられたプローブ(例えばビオチンの使用) とによる例えばfluorescently 分類された蛋白質か小さい分子、厳密に調べられるどちらかである。もう一つの蛍光分類方法はまた非常に敏感の圧延の円の拡大(RCA) である、(32) 。
            比較の下のproteomes がfluorophores との対等な方法で分類することができるがこれらの化学反応の再現性は蛋白質抗体の相互作用の現在との粗末、干渉追加複雑さ(9) である。また、蛋白質の均一でない分類は内部標準が(9) 測定される各ターゲット蛋白質のためにある二重カラーratiometric 試金の実行によってアドレス指定することができる。          fluorophores が付いている分類蛋白質の不利な点はラベルの結合が(9) 蛋白質の結合特性を変えるかもしれないので、試金の量的な正確さの減少である。

直接蛋白質の分類の検出方法がまだ広く使用されるが、述べられる真性問題は蛋白質のmicroarrays のためのラベルの検出方法の増加する使用で自由に起因した。これらの方法は多く分光測定(氏) 、原子力の顕微鏡検査(AFM) (70) 、および表面のプラズモン共鳴(SPR) (71) である。
分子を分類することが蛋白質の作業に影響を与えるので非分類方法に抗体のmicroarrays のための直接検出のアプローチとして利点がある。捕獲された蛋白質(69) の低密度のアレイを検出するのにSELDI (表面高められたレーザーdesorption/ionization) の多く分光測定が使用されていた。蛋白質は金属表面のアレイ(SELDI 蛋白質のアレイ) で捕獲され、レーザ光線を使用して蒸発する。これらの蛋白質の識別を明らかにするために多く分光測定データを使用して分析はそれから行われる。

抗体のアレイ(70) の捕獲された蛋白質を識別する原子力の顕微鏡検査(AFM) 方法使用の表面の位層幾何学変更。ウサギIgG が金の表面で固定し、無料の抗体、ヤギの蟻ウサギIgG 、AFM に結合するとき高さの増加を検出し、こうして相互作用を結合することを測定ことできる。抗原の抗体の相互作用の動力学を–調査してが、実時間検出方法が有用であるどんなに。分子量、親和性および結合率(72-74) の広範囲との受容器のligand の相互作用の–動力学を調査するために表面のプラズモン共鳴(SPR) は多目的な検出のツールに成熟した。しかし商業SPR チップは検出の解像度使用できる限られている。単一のフロー・セルの64 の個々の固定のサイトが付いているセンサーの表面は開発された(75) 。検出方法として平面の導波管を使用して結合する抗原の動力学を調査するために抗体のアレイバイオセンサーはまた開発された。この方法を使用して、グループは重要なシグナルの強度が直径の200 ミリメートル小さい点から達成できることを示した。従ってこのアプローチが高スループット及び平行動力学の調査のために適していることが期待される。(76) 。

検出の範囲
蛋白質とDNA のmicroarrays のもう一つの違いは単一の生物的サンプルまたはセルの蛋白質の集中がmRNAs のためのそれより大きいmagnitute の複数の発注であることである。従って蛋白質チップ探知器システムにmRNA のための104 と比較される1014 年の – 要因まで検出操作の非常に大きい範囲がなければならない。従って特定ターゲットへのnanomolar 親和性の抗体はmicromolar 集中のこのターゲットの存在によって飽和し、pico- またはfemtomolar ターゲット・レベルを検出しない。従って稀で、豊富な蛋白質を取り扱うことはおそらく別のアレイ(7,8,9) を必要とする。
しかしターゲットのための様々な親和性の多重抗体はアレイ調査の異なった領域で配列された抗体の20% だけが低い集中(33) で蛋白質の測定を提供することを示した置かれるかもしれない。

次に: 蛋白質のアレイのための蛋白質の生産

蛋白質及び抗体Microarrays のための参照

に:

蛋白質チップ及び抗体チップへの紹介そして背景。

タイプの抗体及び蛋白質チップ