ホーム > 蛋白質microarrays > 蛋白質チップ接続機構 > index.php
蛋白質のアレイはプロトコルを作成する
|
蛋白質のアレイBioinformatics |
蛋白質のアレイについて学びなさい |
蛋白質のアレイキット及びプロダクト |
蛋白質のアレイフォーラム |
Proteomic のニュース |
蛋白質及び抗体Microarrays
接続機構
最大結合容量(8,27) を達成するように固体表面に蛋白質を接続するためには、基板の表面は修正されなければならない。 蛋白質は蛋白質の接続機構の層のチップに接続する(図3) を見なさい。 この層はアプリケーションの性質と変わる有機性フィルム普通である。 色々な材料はagarose (39) 、デキストラン基づかせていたヒドロゲル(40) 、多孔性の&リアクリルアミドのヒドロゲルの親水性&リマーおよびpolyamino の 酸(41) を含んで調査された。
便利な接続機構方法は硝酸セルロース膜を使用したまたは蛋白質が無指定の相互作用(34,42,43) による表面に受動的に吸収できること多L リジンはガラスにそのような物塗った。 接続された蛋白質は任意オリエンテーションの表面に結合し、厳しい洗浄の条件の下で洗浄することができる。 但し、騒音レベルは無指定のabsorption/adsorption のために通常より高い。
特定およびより強い接続機構は蛋白質(31,36,26) に架橋結合共有にできるガラスの反応表面の作成によって達成される。 自己組み立てられた単一層を(SAM) 、ガラスのヒドロキシルグループとガラス表面を反応させる、および蛋白質の一次アミングループと反応して自由または最大特定性(44,45) に達するために化学的に修正されるそれ以上がある場合もあるもう一人のグループを使用されている1 つの機能グループがある形作るのにbifunctional のシランのcross-linker が。 もう一つの変化は金上塗を施してあるガラス(46,47) である。 金上塗を施してあるチップの利点は反作用の原動力を監視するためにSPR 及び多く分光測定が検出方法として統合することができる及び捕獲された分子を識別するためにことである。
しかし前述の共有cross-linking のアプローチに不利な点がある。反応ligands がまた蛋白質の側鎖にあるという事実のために任意接続機構が蛋白質のネイティブ確認を変えるか、蛋白質の作業を減らすか、またはプローブ(8,27) にそれらを得難くさせるかもしれないことは可能である。
チップの表面からの蛋白質をuniformily 方向づけるためには、蛋白質はアミノまたはcarboxy のtermini の高親和性の札と溶けるかもしれない。 従ってこの方法と、固定されたproteins/antibodies はネイティブ構造に残ってが本当らしくanalytes に蛋白質の実行中のサイトへの有効なアクセスを与える。 この方法は首尾よくニッケル上塗を施してあるスライドガラス(26) に彼の札を含んでいる5800 の融合蛋白質の接続機構によって示された第1 だった。 glutathione/GST のような他の親和性方法はまた使用された(48) 。
接続するためにStreptavidin によって基づかせている固定方法はまたアレイ表面(49) に広くbiotinylated 生物的要素を用いられた。
チップサ&ート材料は蛋白質がphysiochemical 特性に非常に敏感であるので重要である。 しかし例えば、北極のアレイは親水性蛋白質に結合するために化学的に扱われる疎水性領域を(9) 所有しているようにそのような表面がセル膜蛋白質(例えばG 蛋白質によってつながれる受容器) のために不適当の。
蛋白質は核酸のようにしないし、同じ表面化学に露出されたとき異なった蛋白質は異なった方法でする。 異なったタイプは表面化学こうしてある蛋白質の保持を促進し、他の作業の変性か損失を引き起こす。 従って、表面化学の適切な選択はこれが多様なタイプの固定された蛋白質が二次第三構造を保つようにする及びこうして生物活動であるので重要な。 この問題はすべての蛋白質の適切な折りたたみそして機能を得るためにそこにとしてチップ増加の異なった点の番号が、100
つの蛋白質を固定する100 つの方法であるかもしれないとき拡大される。 また重要な問題はほとんどの蛋白質の機能が未知数現在であるので、そうそこにである実際にチップ(7) でまだ機能であるどうかテストするべき方法ない。
次に: 蛋白質チップ配達方法
に: