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PCR はサイトによって指示された突然変異誘発を基づかせていた

�&リメラーゼの連鎖反応のサイトの突然変異誘発

PCR によって基づかせているサイトによって指示される突然変異誘発について学びなさい。

(図表を次に参照しなさい)

私達がTTC のフェニルアラニンのcodon に変えたいと思うTAC のチロシンのcodon の遺伝子を含んでいるプラスミッドから最初に始めなさい。私達がT-A のペアに(青い) オリジナルのペアの変更する必要があるこれを達成するため。このプラスミッドはGATC シーケンス現在でメチル化するE.coli の正常な緊張から隔離された。methyl グループは黄色で示される。これを達成するために次のステップは行われる:

• 繊維を分けるためにプラスミッドを熱しなさい。
• 私達はそれからTTC のcodon を含んでいる、または逆の補数、GAA をアニールするmutagenic プライマー。各プライマーの変えられたベースはピンクで示される。
• 私達はそれからPCR の少数の円形を行う(について8) 変えられたcodon のプラスミッドを増幅するmutagenic プライマーと。プラスミッドのコピーの間違いを最小にするのに私達は熱の安定したDNA の�&リメラーゼを、Pfu の�&リメラーゼのような、使用する。
• メチル化された野生タイプDNA を消化するために私達はDpnI とそれからPCR の反作用のDNA を扱う。PCR プロダクトはインビトロに作られたので、メチル化されないし、切られない。最後に私達は扱われたDNA が付いているE. 大腸菌のセルを変形させる。主義では、mutated DNA しか変形するために存続しない。これは複数のクローンからのプラスミッドのDNA の配列によって点検される。



正常なPCR のための要因

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正常なPCR のための要因

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糸タイトル/�&スター	最後の�&スト	応答	眺め
サイト指示された突然変異誘発PCR についてのヘルプの私基本的な情報 トリプシン	05-01-2008 06:21 PM kmunson779 によって "	1	147
サイトはInvitrogen Genetailor を使用して突然変異誘発を指示した satishreddy27	06-19-2007 03:34 PM satishreddy27 によって "	0	533

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PCR のフォーラムのトピック

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