PCRのポリメラーゼ

右のDNAポリメラーゼを選択して実験の目標によって定められる。 processivity、熱安定性および忠誠でそのから選択するべき膨大商用化されたanzymesが異なるある。 使用される共通の酵素は商業的にTaq DNAポリメラーゼ別名ように、AmpliTaq® DNAポリメラーゼである。

AmpliTaq DNAポリメラーゼ

AmpliTaq DNAポリメラーゼはPCRのための非常に特徴付けられた組換えの酵素である。 従ってTaq DNAポリメラーゼの遺伝子からエシェリヒア属大腸菌で作り出される、大きい純度を保証する。 それは緩衝された50% (v/v)のグリセロールで5 U/μLの解決として一般に供給され、使用される。

物理的なProperities: 酵素は70°-80°C範囲で最も効率的の5 ' - 3 '重合作業の94 kDa蛋白質である。 それは熱循環の点では35-40 min.の95°Cでと非常にthermostable、半減期、半減期であるおよそ100つのサイクルである。 この酵素を使用してPCRの製品に3つの'各々の重合させた繊維の端の単一の基礎突出部分がある(これはT/Aのクローニングベクトルの使用のために開発することができる)。

生物反作用: DNAポリメラーゼは補足因子としてマグネシウムイオンを必要とし、72°C.で発動を促されたテンプレートの拡張反作用に触媒作用を及ぼす。 4つのdNTPsがターゲットシーケンスをコピーするためにプライマーを伸ばすのにtherby使用され。 また修正されたヌクレオチドはPCRの製品に組み込むことができる。

作業: この酵素に構造の扶養家族、高められる重合5 ' - 3 'ヌクレアーゼの作業フォークのようにaがある。 それが所有している作業はそれを可能にするチタニウムは下流のプライマーを低下させ、circukaターゲットが拡大の前に一直線に並べられるべきであることを示した。 またこのヌクレアーゼの作業はPCRのquantitationのための蛍光シグナル生成の技術で用いられた。 この酵素に固有の'ない- 5つ'のexonucleaseまたは校正の作業3つ、しかしほとんどのアプリケーションのための高い収穫のampliconsを作り出す。

AmpliTaqの金のポリメラーゼ

この酵素は化学的に修正されたAmpliTaq DNAポリメラーゼ、可逆修正保つ酵素を室温で作動しないである。 高温および低いpHは酵素活性を復元する逆転を促進する。 これらの条件は92°-95°CにTris緩衝されたPCRに発生する(TrisCLは90°C)の上のpH 7.0の下で25°C低下でpH 8.3に作り出した。 AmpliTaqの金は5 U/μL AmpliTaq DNAポリメラーゼと同じを行うために作り出される。 従って、ホットスタートはAmpliTaqの金を代わりにし、10分、95°C、前PCRのアクティブ化のステップを追加することによってAmpliTaq DNAポリメラーゼと最適化されるほとんどのPCRsに追加することができる。

同じ結果を前PCRアクティブ化のステップなしで追加10ことができるまたはより多くのPCRのサイクルの追加によって達成する。 このような状態で、酵素はPCRの変性のステップの間にインクレメンタルに作動する。

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