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PCR プロダクトの分析

PCR プロダクトのAgarose のゲルの電気泳動の分析

すぐににそして容易にPCR プロダクトを、3% NuSieve 使用されたGTG のagarose (Bioproducts 、Rockland 、私FMC) およびTBE (89 ミリメートルのTris ホウ酸塩、2 ミリメートルのEDTA) またはTAE (Tris アセテート40 ミリメートル、2 ミリメートルのEDTA 、pH およそ8.5) でランされる1% Seakem GTG のagarose (FMC Bioproducts) のゲルがあるできる分析し、解決しなさい。解決するDNA バンドはethidium 臭化物のおよそ0.5 g/mL のゲルの μ汚損によって検出されたり、destaining に水かSYBR の緑1® と(Molecular Probes Inc. 、Eugene 、または) 先行して、紫外線照明の下で最終的に撮影される。プロダクトのサイズの推定値のために便利なマーカーとして123-basepair (bp) または(kbp) 1-kilobasepair 梯子を使用しなさい。

PCR プロダクトを分析する他の分析的な方法

ethidium のようなPCR の製品解析のために、使用できる色々他の検出方法が臭化物汚した8 つの10% の–�&リアクリルアミドゲル、96-well microplates の南ゲルまたはdot/blots TBE バッファでランされて、subcloning および直接配列、少数を指名するHPLC の分析、および使用、ある。逆は非放射性検出を用いる方法コンバインPCR の拡大に点しみを付ける。拡大の間のPCR プロダクトの実時間の、オンライン定量化のための適した器械とともにPCR への蛍光染料の導入は、運動PCR または量的なPCR の開発をもたらした。試薬が限られるようになる時拡大が傷つきやすく、すなわちなる前に量的なPCR (QPC) は反作用の指数段階の間のPCR プロダクト蓄積を測定し。(応用生態系) ABI プリズム7700 およびLightCycler (Roche の分子Biochemicals 、Mannheim 、ドイツ) は1 サイクルにつきまたは一度絶えず監察する蛍光性を可能にする統合された蛍光検出装置である。野生タイプシーケンスからのsinglebase の突然変異を区別するためにこれらの器械はまた溶ける特性によってPCR プロダクトを、例えば特徴付ける、ことができる。最近設計されていたMx4000™ マルチプレックス量的なPCR システム(Strategene 、La Jolla, CA) は多重蛍光リアルタイムQPCR の試金のデータを生成し、分析できる。