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Proteomics

セルの蛋白質のproteome かセットがどのようにの調査されるか情報。

Proteomoics 方法

セルの蛋白質内容はたくさんの異なったタイプの表現のダイナミックレンジが付いている蛋白質から成るために推定される。現在使用されている技術は蛋白質コン�&ーネントの検索、この非常に複雑な混合物の分別、各々の分けられ、隔離された種の酵素の蛋白質加水分解、広汎な多くの分光分析および最終的に知られていた蛋白質または予想されたゲノムの表現プロダクトのデータベースに対して生成される構造データに一致させることを含む。

このプロシージャは1 を使用して第一歩か2 次元電気泳動(DE) を含む。1-DE を使用して、蛋白質は分子大容量に基づいて分かれている; 技術は再生可能、が蛋白質に10 300 kDa の多くの範囲で–使用することができたり解像度を限定した。より複雑な蛋白質の混合物の分離のための、2-DE は好まれた方法である。次にこれは、第2 次元で、等電集中のステップによって純充満に従って蛋白質をナトリウムの高い分離のeciency を与えるdodecyl 硫酸塩�&リアクリルアミドのゲルの電気泳動(SDS-PAGE) を用いる分子大容量に従って最初に分けることを含み。

 多く分光測定(氏) は分けられた蛋白質の識別のための選択の方法、および2-DE 及び多く分光測定今表す複数の千の蛋白質が自動化された方法で分かれて、検出され、識別することができる技術をである。

Proteomics の方法はペプチッドフラグメントの混合物をもたらすために蛋白質分解消化力を経る興味の蛋白質の切除に先行している2-DE による蛋白質の分離そして位置によって最初に終った。ペプチッドはペプチッド大容量指紋の分子大容量決定そして生成のためのMALDI-MS を使用して多く分光測定によって、最初に分析される。この段階で検索するデータベースが曖昧な結果をもたらせば、より厳しいデータベースの検索のために使用されるシーケンス情報を生成するのに第2 大容量分光分析、ESI-MS/MS が、使用されている。

蛋白質のダイジェストの混合物の分析で、ペプチッド大容量マップかペプチッド多くの指紋はペプチッドフラグメントのすなわち分子大容量得られる、多くスペクトルから確認することができる。それ以上の分析のための必要性なしで蛋白質を首尾よく識別するためにアミノ酸シーケンスが十分に一義的、多くの正確さ十分に高くなら頻繁に、–多くのマップが12 15 データベースを検索するのに使用することができる。、しかし、データベースの検索は曖昧な結果をもたらす、シーケンスを、かこれらのペプチッドのためのシーケンス札として、知られている部分的なシーケンス生成するためにタンデム多く分光測定(MS/MS) の使用を含むそれ以上の氏の分析は混合物の各ペプチッドで次々に引き受けられる。これはESI-MS/MS19 の使用によって頻繁に達成され、あるかもしれない洗剤および塩からペプチッドを分けるために通常追加浄化のステップは行われなければならないペプチッドシグナルの減少を引き起こす。

ペプチッドの分子大容量およびシーケンス札情報両方と検索するそれ以上のデータベースは明瞭な蛋白質の識別をもたらすべきである。

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版権の分子端末2006 年