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ライブラリを選別する膜の交配

膜の交配を使用してスクリーニングライブラリ

温度及びイオンの状態の下で集中はセルで見つけた、形式が各繊維のA 及びT ベースそしてG 及びC ベースをbetwen ことDNA はデュプレックス(2 座礁させた) 構造で水素結合によって維持される。DNA のデュプレックスは単一繊維にdilute 塩水濃度(例えば、0.01 のM のNaCl) のそれらを、通常熱することによって、または11 の上のpH を上げることによって変化させることができる。温度が、そして下がれば解決のイオン集中はpH がで中性及びGC の補足の単一繊維間の基礎ペアの改良に下がれば、または上がる。

このプロセスは多くの名前によって行く: renaturation 、再連合、アニールする交配。核酸の混合物では、補足領域を含んでいる唯一の補足の単一繊維(か繊維は) 再提携する; 再連合の範囲はnoncomplementary 繊維の存在によって事実上変化しない。そのような分子交配はDNA またはRNA の、またはRNA の繊維とDNA の繊維間の2 つの補足の繊維の間で起こることができる。特定のDNA のクローンの検出の分子交配を利用するためには、組換えのDNA の分子からの単一の座礁させたDNA は固体サ�&ート、一般に硝酸セルロースフィルターか扱われたナイロン膜に接続する。single0stranded の核酸を含んでいる解決がそのような膜で乾燥するとき、単一繊維は不可逆的に補足の繊維に交配のために使用できるベースの最も葉固体サ�&ートにある意味では区切られるようになる。この不可逆結合が健康でない理解されて化学が、プロシージャ非常に有用であるが。膜は膜に区切られる核酸の一部に補足であるRNA) または放射能によって分類された単一座礁させたDNA をincubated (含んでいる解決でそれから。

交配の条件の下で(中立pH 、40-65 C 、0.3-0.6 のM のNaCl の近くで) 、この分類されたプローブは膜に区切られる補足の核酸に交配させる。交配させないどの余分なプローブでもフィルターの放射線写真法によって、分類されたハイブリッド検出される洗浄され。E. 大腸菌の芝生のプラクで現在の組換えのlamda のvirions はナイロン膜にペトリ皿の表面に膜を置くことによって転送される。各プラクのウイルスの粒子の多数は膜の表面に吸収するが、多くのvirions は膜の表面で多数の個々のlamda のクローンを含んでいるペトリ皿の栄養寒天の表面のプラクに再生される残る。

lamda のクローンのコレクションを保存するためにオリジナルのペトリ皿は冷える。膜はカプセル化されたDNA を解放し、変化させるvirions を破壊するアルカリ解決でそれからincubated 。膜の表面への組換えのlamda のDNA を固定する膜はそれから乾燥する。次に、膜は交配の条件の下のradiolabeled プローブとincubated 。Unhybridized のプローブは洗浄され、フィルターは放射線写真法に服従する。

autoradiogram の点のappearence はプローブに補足DNA を含んでいる組換えのlamda のクローンの存在を示す。autoradiogram の点の位置はその特定のクローンがプラクを形作った元のペトリ皿の位置に対応する。元のペトリ皿がまだ各プラクで多くのinfectioua のvirions を含んでいるので、識別されたクローンからのウイルスの粒子は置換のためにautoradiogram およびペトリ皿を一直線に並べ、点に対応するクローンからウイルスの粒子を除去することによって回復することができる。同じような技術はE.coli のセルのプラスミッドライブラリを選別する為に応用である場合もある。