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Maxam Gilbert の配列

DNA がどのように配列されるか

Maxam-Gilbert 方法を使用して配列するDNA

配列するMaxam-Gilbert はDNA を試験管内で総合し、チェーンターミネータとの統合の反作用を停止するかわりに配列する実物大の、端によって分類されるDNA からDNA のこの方法とこの方法開始し、基礎特定の試薬とのそれを裂く。そうこの方法がグアニンベースをどのように使うか、しかし同じ主義すべての4 つのベースに適用する; 最初に私達は私達が配列したいと思うDNA のフラグメントを終り分類する。

これは- 終了する分類を’5 - または’3 のどれである場合もある。次に、私達は1 種類のベースを修正する。グアニンをメチル化するのにここに私達はジメチル硫酸塩(DMS) を使用する。(実際に、この試薬はまたadenines をメチル化するが、ない方法でそれはDNA の繊維の開裂を。もたらす) チェーン終了方法でように、私達はあらゆるグアニンに影響を与えたいと思わないまたは私達は私達がDNA s シーケンスを定めることを可能にしない極小のフラグメントしか’作り出さない。従って、私達はDNA の1 繊維につき1 メチル化されたグアニンだけの平均をもたらす穏やかな条件の下でメチル化をする。次に、私達は2 つの事をする試薬(ピペリジン) を使用する: それにより無くなったベース(apurinic サイト) のサイトでメチル化されたベースの損失、それからそれを壊すDNA のバックボーンを引き起こす。この場合、シーケンスの真中のG はメチル化され、従って繊維の破損はそこに起こり、分類された三量体を作り出す。

別のDNA の分子では、最初のG はメチル化でき分類された隣酸塩をもたらす(ベースおよび砂糖は化学開裂で失われる) 。最終的に、electrophorese 私達は鎖終了方法のように放射線写真法によってプロダクトそれらを、ちょうど検出し。当然、私達は他の3 つのベースで裂く3 つの他の反作用をランする必要がある。これをする複数の方法がある。例えば、私達は酸が付いているアデニンそしてグアニン両方にグリコシドの結束を弱めることができる; それからピペリジンにより両方ように及びGs の後のdepurination 及び繊維の破損を引き起こす。electrophorese 私達が比較するとようにこれG の反作用だけの側のA + G の反作用、私達得ることができれば。同様に、ヒドラジンはthymine 及びチトジンの両方リングを開け、ピペリジンはそしてこれらのベースを除去し、生じるapyrumidine のサイトでDNA の繊維を壊すことができる。1M のNaCl の前で、ヒドラジンはチトジンだけのために特定である、従って私達はC+T の反作用の隣でこの反作用をランし、比較するとTS を得ることができる。

版権の分子端末2006 年