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FACS

FACS の技術

休息のリンパ球は特定の抗体を使用して検出することができる、セル表面蛋白質の相続人の差動表現に基づいて互いと識別され、区別される多くの機能subpopulations から成り立つ。

流れCytometry

リンパ球を定義するおよび量を示す強力なツールはレーザ光線を通ってストリームで渡る個々のセルを検出し、数える流れのcytometer である。識別されたセルを分けるために装備されている流れのcytometer は蛍光性作動したセル選別機(FACS) と呼出される。これらの器械がmonoclonal 抗体のセル表面蛋白質を使用して識別されるセルサブセットの特性を調査するのに使用されている。混合された人口内の個々のセルは処置、または分類された反免疫グロブリンの抗体に先行している特定の抗体によって蛍光染料と分類される特定のmonoclonal 抗体と最初に付く。分類されたセルの混合物は間隔で単独で間隔をあけられるセルを含んでいる液体の良いストリームを作成するノズルを通して塩の多くのarger ボリュームとそれから強制される。各セルがレーザ光線を通してそれを渡すのでレーザー光線を分散させ、セルに区切られたどの染料の分子でも興奮し、蛍光を発する。

敏感な光電子増倍管管はセルのサイズそして細かさの情報を与える、および従って各セルによってセル表面蛋白質の表現の分類されたmonoclonal 抗体の結合の情報を及び与えるflorescence の放出を両方検出する分散させたライト。セル選別機では、ノズルからストリームがしぶきに分割する精密な時に液体のストリームを通してコンピュータに通じるシグナルが生成するのに渡される電荷、single.cell よりこれ以上含んでいるそれぞれ使用されていない; 充満を含んでいるしぶきはしぶきの主要なストリームからpositively-charged しぶきがnegatively-charged 版に引き付けられる、そして逆に渡るように版の間で反対充満のと同時にそれから逸らすことができる。こうすればでは、分類された抗体の結合によって区別されるセルの特定のsubpopulations はセルの混合された人口から浄化することができる。代わりに、セルの人口を減らすために、同じ螢光色素が異なった抗体を様々で望ましくないセルタイプによって表現されるマーカー蛋白質で指示されて分類するのに使用することができる。

セルソート

セル選別機が無標号のセルだけを保つ不用なチャネルに分類されたセルを指示するのに使用することができる。セルが単一の蛍光抗体と分類されるとき、流れのcytometer からのデータは通常セル番号対蛍光性の強度のヒストグラムの形で表示される。2 つまたはより多くの抗体使用されれば、1 の抗体と分類するセルの人口が第2 抗体との分類によって更に細分することができること別の蛍光染料につながれるそれぞれデータは二次元の散布図のまたは抗体と染め分類される1 の蛍光性が秒のそれに対して計画される結果を用いる輪郭の図表として通常表示されて彼形作るである。多数のセルの検査によって、cytometry 缶は与える異なった分子に耐えるセルのパーセントの量的なデータを流れる。FACS の技術の力が育ったので、漸進的に明瞭な蛍光染料と分類されるより多くの抗体は同時に使用することができる。

3 つ、4 つは非常に強力な機械によって及び5 つのカラー分析を今扱うことができる均等にする

FACS はプロトコルを作成する