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最近のフォーラムの�&スト

多く分光測定

多く分光計は何であるか。

多く分光計は異なった化学薬品に異なった大容量がある、これは定めるものがであるという純然たる事実にどんな化学薬品がサンプルにあるか基づき。ただイオンを別様に分析するためしかし異なったタイプのイオンを作り出すため多くのタイプの多く分光計がある; 但し方法でイオンの経路を変更するのに皆電気及び磁界使用する。

1980 年代後期及び1990 年代初期の間に、サンプルイオン化の2 つの新しい方法により多く分光測定は生物高分子物質の分析、即ちESI 38 の回転を経た、前にディケイドにわたるMALDI.39 はちょうど、はじめて、100 kDa 以上femtomole の量の蛋白質の分子大容量を測定できる大容量分光技術0.01% の正確さより頻繁によくするために、蛋白質の化学者に使用できるように広くなった。これらの方法はanalyte の重要な劣化のない大きく、変化しやすいbiomolecules からのイオンの形成の両方とも成功している。それらは両方とも敏感な技術であるただしかしまた迅速な – 氏及びMS/MS 両方シーケンススペクトルは秒の内に得ることができる。ESI そしてMALDI は、多くの相違のために、補足であり、多くの生物高分子物質の実験室に両方の技術へのアクセスがある。

サンプル準備: 2 次元の電気泳動および多く分光測定

一般に多くの分光技術のためのサンプル分離、分離および準備は、2-DE (2-Dimenisional 電気泳動) 、単一の実験の5000 の蛋白質多数を分けることができる技術を含む。大将では、2-DE は3.5 10 と�&スト�&訳によって修正される蛋白質(例えばphosphorylated) と非修正された–友達の間で区別及ぶ分子大容量の等電�&イント(pI) 範囲内の蛋白質を分けることができできる、また6 から300 kDa まで。分けられて、蛋白質コン�&ーネントは汚損技術(例えば銀製の汚れ、蛍光汚れ、Coomassie の青) によって明らかにされ、一度置かれてゲルからそれから得ることができる。蛋白質は多くの分光分析にとって有害である洗剤の使用のないゲルから容易に溶離されることができない; その上に、大きい蛋白質は(例えばglycosylation の結果として) 異質でありがちでなく、従ってデータベースの対応するエントリと関連していることができる分子大容量を所有している。これらの障害を克服するためには、溶出のステップは蛋白質が物品税を課されたゲルの部分の水様のアセトニトリル洗浄によって消化された後達成されがちである。これは抽出5 のそして出版されるようにまたはマイナーな修正と記述され、広く使用されるトリプシンを用いるゲルの消化力方法の使用による収穫を作り出す蛋白質の識別が作ることができる氏互換性があるサンプルを増加する。システインの残余の間にある二硫化物橋を裂き、妨げるために消化力のステップは任意選択減少及びアルキル化のステップによって先行することができる。それに続く酵素の消化力を遂行するために第2 ゲルからの蛋白質の点の切除を自動化するようにロボティックシステムは開発され、MALDI-MS にサンプルを転送するために最初の氏の分析のための版を目標としなさい。多くのアプリケーションのために、ゲルの消化力から回復されるペプチッドは多く分光測定によって分析される前に集中及び浄化を必要とする特にESI が使用されるイオン化方法なら。逆転させた段階の高性能の液体
クロマトグラフィー(HPLC) はこれを達成する1 つの方法である; 別の方法はZipTips (先端Millipore) (C18 材料と詰まるピペットの) またはPoros R2 の散水の使用を材料(Perseptive の生態系) 含む。広まった受諾にもかかわらず、2-DE の限定は膜蛋白質のような疎水性蛋白質と同様、非常に小さくか非常に大きい蛋白質、非常に酸性か非常に基本的な蛋白質の排除を、含んでいる。それはそれ考えられる
ゲルロードされた蛋白質の20% だけは視覚化され、分析することができる。他の抑制はロードすることができるサンプルの量が限られていることでありnon-observance をの引き起す
低い集中蛋白質にまたそれ最も一般的な汚損技術非線形レス�&ンス・ファクタがあり。実際に、2-DE はサンプルを汚染するケラチンのような不純物のための機会を提供する手動処理のステップを含む労働の集中的なプロセスである。1 つの第2 ゲルは氏によっておよびオートメーションが汚染問題を助け、分析を幾分スピードをあげることができるが完全な構造解析のための約1 月を完了するために日取る。

代わりとなる蛋白質の分離技術

代わりは開発の下に、蛋白質の準備の氏互換性がある方法あるが、誰も技術は普遍的な置換として現れた。これらの方法はそれにより予備氏の分析のための時間のかかるサンプル準備のステップそして必要性を除去するMS/MS の分析に蛋白質のサンプルを直接インターフェイスさせることを一般に向ける。毛管等電集中(より大きいペプチッド分離がMS/MS の分析前に好ましければ2DE 及びこれへの代わりが多次元クロマトグラフィーに導いたと同時にサイズの排除クロマトグラフィー氏がより好ましいalternative.The 先行させているCIEF)-MS 及びpreparative 等電集中は分離のeffciency 、ピーク容量、精密およびずっと強さによって2-DE との比較された詳細である前の現われることの方法、指示するオンラインでを使用して蛋白質の混合物からの複雑なペプチッド混合物の分析を、逆転させた段階の高性能の液体クロマトグラフィー帰宅している(HPLC)-MS/MS は首尾よく使用された。二次元クロマトグラフィーの例は逆転させた段階のHPLC に先行している逆転させた段階のHPLC 及びサイズの排除クロマトグラフィーに先行している陰イオンまたは陽イオン交換が含まれている。別のものは、代替的アプローチずっと全体蛋白質のtryptic ダイジェストの分析のためにESI MS/MS につながれる毛管electrophoresis(CE) とともに結合されたsolid-phase マイクロ抽出を使用することである。この方法はペプチッドフラグメントの高リゾリューションの分離をできこの特定のイーストリボゾームの複合体–の蛋白質の80 90% の識別を許可する。microfluidic 氏への装置をつなぐことは選択的な蛋白質の分別のためのnano ESI 氏analysis.A の別のアプローチとの端正にインターフェイスと同様、サンプル処理及び分離を結合するそれ以上の作戦、であり、識別はMALDI-MS によって分析される蛋白質の特定のクラスを捕獲するために抗体または化学的に修正された表面を使用して表面の捕獲方法を用いるProteinChip の技術(Ciphergen) を使用する。表面として知られていたこの技術はレーザーの脱着のイオン化を高めた(SELDI)-MS35 に、異なったサンプルの蛋白質内容の比較のための大きい潜在性がある。