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Edman の自動化された劣化

アミノ酸シーケンスはEdman の自動化された劣化によって定めることができる

ペプチッドのアミノ酸構成は断固としたである。  ペプチッドは構成アミノ酸に24 時間110.C の6 N HCl のそれを熱することによって加水分解される。  水解物のアミノ酸がコラムのionexchange クロマトグラフィーによってsulfonated �&リスチレンを及びニンヒドリンことをとそれらを反応させることによって量的に表わされての分けることができることをスタンフォードMoore 及びウィリアムステインは示した。 

アミノ酸は黄色いカラーを与えるpraline を除いて二次アミノグループを含んでいるのでこの方法弾力性を強く青いカラー、扱った。  解決それのアミノ酸の集中は暖房の後の解決の光学吸光度に比例しているニンヒドリンとの。  この技術はthumbprint で現在の量についてあるアミノ酸のマイクログラム(10nmol) を検出できる。 

アミノ酸のnanogram が(10 pmol) 非常に蛍光プロダクトのアミノのグループと反応するfluorescamine によって検出することができると同様に少し。  アミノ酸の識別はバッファのボリュームでコラムからアミノ酸を取除くのが常であった溶出ボリュームによって明らかにされる。 

蛋白質またはペプチッドのアミノターミナル残余は安定した共有リンクを形作る混合物とのそれの分類によって識別することができる。 

Fluorodinitrobenzene (FDNB) はFrederick Sanger によってこの目的のために最初に使用された。  Dabsyl の塩化物は高い感度と検出することができる激しく着色された派生物を形作るので今一般的である。  ペプチッド結束を加水分解する条件の下で安定しているスルフォンアミドの派生物を形作るためにそれはuncharged a-NH2 グループと反応する。 

アミノターミナル残余を定める為のdabsyl 方法は敏感、強力であるが、ペプチッドが酸加水分解のステップで全く低下するので同じペプチッドで繰り返し使用されることができない。  Pehr Edman はアミノターミナル残余を分類し、他のアミノ酸の残余間のペプチッド結束を破壊しないでペプチッドからの裂く為の方法を案出した。  Edman の劣化はペプチッドのアミノの端から次々に1 残余を一度に取除く。  phenylthiocarbamoyl の派生物を形作るためにPhenyl イソチオシアネートはペプチッドのuncharged ターミナルアミノグループと反応する。  そして、mildy 酸性条件の下で、そのままなペプチッドを1 アミノ酸によって短くされて去るターミナルアミノ酸の循環派生物は解放される。

蛋白質の構造の分析はアミノ酸シーケンスの決定のための自動化された器械であるsequenators の開発によって著しく加速された。  liquid-phase sequenator では、回転の円柱コップの蛋白質の薄膜はEdman の劣化に服従する。  試薬および抽出溶媒は蛋白質の固定されたフィルムを渡され、解放されたPTH アミノの酸は(また高性能液体クロマトグラフィー、HPLC と呼出される) 高圧液体クロマトグラフィーによって識別される。 

Edman の劣化の1 つのサイクルは2 時間以下に遂行される。  繰り返された劣化によって、蛋白質の約50 残余のアミノ酸シーケンスは断固とした行う場合もある。  Gas-phase sequenators はpicomole の量のペプチッド及び蛋白質を分析できる。  SDS �&リアクリルアミドのゲルの単一バンドから溶離される蛋白質のサンプルのシーケンスを分析するためにこの高い感度はそれを実行可能にさせる。