ゲルの電気泳動の問題

[hsip_15]

貴重すべて、

電気泳動を用いる私の最初試験で、私はManiatis 使用した、40mM のTris アセテート、pH から7.0 及び0.5M のEDTA pH8.0. この試験成っていた2001 で推薦されるようにTAE バッファを私はDNA の梯子(Fermentas) を含むバンドを得損った。

これからの試験、私は0.04M のTris アセテートから成っていたMickel によって文献に基づくKado 及び劉によって推薦されるようにTE バッファ試みた競技場およびBauer を使用することを(R12 得られたプラスミッドDNAs 、核酸の研究 の物理的性質そしてゲルの電気泳動の動作) 、および2mM のEDTA 、pH 8.1 。最も最近の試験、私にプラスミッドの私のサンプルのためのかすかなバンドがあり、しかし私がゲルの両端に井戸で梯子をロードしたが制御(pUC19) のためのより強いバンドは全然梯子示さなかった。それはなぜそうあるか。何が間違ったかもしれないか。

もう一つの質問は紫外線照明、ゲル(サンプル井戸が付いている否定的な端) の半分の下に、残りの半分より明るいようであるである。ゲルの真中に両端間に明確な相違がどこかにある。それはなぜそうあるか。

ありがとうのalot 。

[kmunson779]

私がする最初の事は汚損のプロトコルを点検することである。あなた使用のEthidium 臭化物または何か他のものはであるか。、サンプルに追加するか、ゲルに汚れをまたはpost-run 汚れているか。

EtBr を使用して、ゲルに追加して、EtBr が陰極(サンプル井戸がある) の方にゲルの端移行するのでその半分汚された半分ないのゲルが模造するのを見る。post-run 汚損またはゲルをdestaining によってこれを固定でき(実行の後の5-10 分のアジテータの水かバッファで洗浄する) 。

これが事実でなければ、1 つが焼き付けられるかどうか紫外線transilluminator の球根を確認するべきである。これによりtransilluminator の暗い領域を引き起こす。

目によって視覚化するか、またはソートのカメラを使用している(polaroid かCCD) か。DNA が カメラが付いているより目によって視覚化することをもっとたくさん必要とする。多分サンプルに梯子よりより多くのDNA がある、従ってサンプルおよびない梯子を見ることができるか。

私は修理するのを助けることができるずっと電気泳動を前に行っている実験室のだれでもないこと驚く。している何を丁度見ることができる誰かは間違って行っているどこで把握することの途方もないヘルプである。

[hsip_15]

親愛なるKmunson779 、

敏速な応答を再度ありがとう。

まず第一に、私は私のゲルにEtBr を追加した。そう、答えは私に大きいヘルプである。

そして、私は紫外線transilluminator の下で両方、カメラを使用してそしてまた目によるゲルをvisulized 。両方とも同じ結果を示した。

私は理由の不確実であることに遺伝学をしている微生物学によって現在及びそれがようである少数に尋ねることを試み。

百万に感謝する。

[kmunson779]

カメラへのアクセスを有すれば、私はゲルの全然何でも見ることができるかどうか見る大いにより長い露光時間の試みを提案する。

高い蛍光背景を有すれば、ゲル従ってあなたをdestaining 試みはバンドをよりよく見ることができる。

梯子の真新しい因数を試みなさい-- 、知っているどの位DNA を追加しているかきれいである何のよう見るべきであることを丁度知っているのでこれは大きく肯定的な制御の。より古い管を使用したら、サンプルの上でmucking DNAse の汚染か何か他のものを有してもよい。