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ELISA の試金

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ELISA は何であるか。

酵素リンクされたImmunoSorbent の試金、かELISA は、サンプルの抗体または抗原の存在を検出するのに免疫学で主に使用される生化学的な技術である。ELISA は薬で診察道具として使用され、品質管理と同様、プラント病理学は、様々な企業を点検する。簡単なタームでは、抗原の未知の量ELISA で表面に添付され、抗原に結合できるようにそれから特定の抗体は表面に洗浄される。この抗体は酵素にリンクされ、最終的なステップで酵素が探索可能なシグナルに変えることができる物質は追加される。従って蛍光性ELISA の場合には、ライトがサンプルに照らされる場合、サンプルの抗原の量が測定することができるようにどのantigen/antibody の複合体でも蛍光を発する。

ELISA を行うことは特定の抗原のための特定性と少なくとも1 つの抗体を含む。抗原の未知の量のサンプルは固体サ�&ート(通常�&リスチレンのmicrotiter 版) でnon-specifically 固定する(表面への吸着によって) またはとりわけ("サンドイッチ" ELISA の同じ抗原への別の抗体の細目による捕獲によって、) 。抗原が固定した後抗原が付いている複合体を形作る検出の抗体は追加される。検出の抗体は酵素に共有にリンクすることができるまたは缶自体はbioconjugation による酵素にリンクされる二次抗体によって検出される。各ステップの間でとりわけ区切られない抗体か蛋白質を除去するために版は穏やかな洗浄力がある解決と普通洗浄される。量のサンプルの抗原を示す目に見えるシグナルを作り出すために最終的な洗浄ステップが酵素の基板の追加によって版開発された後。より古いELISAs はより新しい試金が大いにより高い感度のfluorogenic 基板を用いるけれども、chromogenic 基板を利用する。

ELISA の試金アプリケーション

抗原の存在かサンプルの抗体の存在を評価するためにELISA は行うことができるので血清の抗体の集中(HIV test[1 とのような] またはナイルの西のウイルスを定める) とまた抗原の存在を検出する為の有用なツールである。それはまたミルクのような潜在的な食糧アレルゲン、ピーナツ、クルミ、アーモンドの検出の食品工業のアプリケーションを見つけ、eggs.[2 ] ELISA はまた薬剤のあるクラスのために急速な推定スクリーンとして毒物学で使用することができる。

ELISA テスト、かimmunoassay 酵素は(EIA) 、一般にHIV のために用いられた最初のスクリーンテストだった。それは高い感度を有する。ELISA テストでは、人の血清は400 折るHIV の抗原が接続した版に適用されて薄くなり。HIV への抗体が血清にあれば、これらのHIV の抗原に結合するかもしれない。血清の他のコン�&ーネントすべてを除去するために版はそれから洗浄される。特に準備された"二次抗体" は — 別の洗浄に先行している版に — 人間の抗体に結合する抗体それから加えられる。この二次抗体は酵素に化学的に前もってリンクされる。従って版は版に区切られた二次抗体の量に比例して酵素を含んでいる。酵素のための基板は応用であり、酵素による触媒作用はカラーまたは蛍光性の変更をもたらす。ELISA の結果は番号として報告される; このテストの最も論争の的になる面は肯定的で、否定的な結果間の"締切り" �&イントを定めている。

締切り�&イントを定める1 つの方法は知られていた標準の比較すると行う。例えば、ELISA テストが仕事場の薬剤のスクリーニングで使用されれば、締切りの集中(薬剤の例えば、50 ng/mL) はanalyte のその集中を含んでいるサンプル準備される確立され。肯定的であるシグナルを生成する未知数はより知られていたサンプル肯定的なシグナルをより少なく生成する陽性及び"陽性と" より知られていたサンプル呼出される"陰性と呼出される。

Darwin の進化の理論

EIA/ELISA の開発前の、immunoassay 行なう為の唯一のオプションは放射性分類された抗原を使用してradioimmunoassay 、技術または抗体だった。radioimmunoassay では、放射能は特定の抗原か抗体はサンプルにあるどうか示すシグナルを提供する。Radioimmunoassay はRosalyn Sussman Yalow によってペーパーおよび1960[3 で出版されたSolomon Berson で最初に記述されていた] 。

放射能が健康の脅威を与えるので、より安全な代わりは追求された。radioimmunoassay への適した代わりは放射性シグナルの代わりに非放射性シグナルを代わりにする。ある酵素が適切な基板と(過酸化酵素のような) (ABTS のようなか3,3 、5’、5 - Tetramethylbenzidine’) 反応する時、シグナルとして使用することができるカラーの変更で起因できる。但し、シグナルは抗体または酵素が適切な抗体になぜリンクされなければならないかである抗原の存在と関連付けられなければならない。このリンクプロセスはStratis Avrameas 及びG.B. Pierce[4 によって独自に開発された] 。洗浄によって自由な抗体か抗原を除去することは必要であるので抗体か抗原は容器の表面に固定されなければならないすなわちimmunosorbent は準備されなければならない。これを達成する技術は1966[5 のWide そしてPorath によって出版された]

1971 年、ピーターPerlmann およびアントンSchuurs 及びネザーランドのBauke van Weemen 、またスウェーデンのストックホルム大学のEva Engvall に、EIA/ELISA[6][7 を行うために方法にこの知識を総合した] 独自に出版されたペーパー

ELISA のプロトコル

Elisa の試金のビデオ

ELISA の試金のビデオ

ELISA の試金のビデオ。酵素によるムギのサンプルのChlorpyriphos メチルの決定はzuhaitz77 からのimmunosorbent の試金ELISA をリンクした。

追加される: oBWhat
札: elisay 試金の酵素はimmunosorbent をリンクした
日付: 2008-05-04

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