 |
|---|
私達の フォーラム で掲示するか、または私達の高度機能を使用できる前に登録しなければならない。今レジスター! その自由および速い!
既に登録されるか。次の今ログイン。
既に登録されるパスワードを忘れ、か。それを回復する次のクリック。
科学は無知の地形である。~Oliver Wendell Holmes のSr 、医学エッセイ1883 年
版権2007 の分子端末
南にしみが付くことは発明家および開発者のEdwin M. Southern 1975 年にイギリスの生物学者の名にちなんで名付けられる技術である。南にしみが付くことはDNA (例えば細胞DNA) の大きく、複雑なサンプルの特定のDNA シーケンスの検出を(遺伝子または他) 可能にする技術である。
"PCR の前に安く絶食し、変更した遺伝学である宇宙の私達の眺めを、南しみはだった普遍的な役馬配列する。段階の南しみを用いなかった分子遺伝学に実験がなかった。それは有用なツールまだであり。"歴史的データを解読できるようにそれについて知る必要がある
南しみtechnique.Figure の図表は版権である。講議または科学のプロジェクトのためにそれを使用するために望んだら許可のための私達に連絡しなさい。
ステップ 1 では、DNA は制限のendonucleases と消化される。高分子量のDNA はより小さいフラグメントに消化される。
ステップ 2 では、DNA はagarose のゲルの電気泳動によるサイズによってそれから分かれている。
ステップ 3 では、(紫色) バッファ解決にagarose のゲルの上にナイロンまたは硝酸セルロースの膜のシートは置かれる。これはしみが付くか、または転送の段階考慮される。圧力は吸引を使用してまたは膜の上にペーパータオルおよび重量のスタックおよびゲルを置くことによるゲルにゲルと膜間の接触を保障するために均等に適用される。膜にゲルからDNA を移動するのに最高潜在性の領域からの干潮潜在性の領域への毛管処置によるバッファ転送が(通常フィルターペーパー及びペーパーティッシュ) それから使用されている。(紫色) DNA がnegatively-charged DNA とpositively-charged 膜間のイオン相互作用によって膜に高い親和性と結合するようにするPositively-charged 膜は通常使用される。
ステップ 4 では、 硝酸セルロースの膜は高い温度への露出によって焼ける(60 から100 から.C) 。ナイロン膜は紫外線放射…にさらされる。膜にバンドで現在のDNA の常置及び共有架橋結合を保障するのにこれらのステップが使用されている。
ステップ 5 では、 膜はradiolabeled プローブ…にさらされる。このプローブはあなたが検出したいと思う興味のシーケンスがある単一座礁させたDNA のフラグメントである。膜によってこのプローブがincubated 、膜のDNA と交配させる。プローブは蛍光かchromogenic 染料のような非放射性のより新しいプローブがまた使用されるどんなにフィルムで検出されるように通常radiolabeled である。交配の後で、余分で自由なプローブはとりわけ区切られたプローブを去る膜から洗浄される。
ステップ 6 では、交配のパターンは放射性か蛍光プローブの場合には放射線写真法、または膜のカラーの開発によるX 線フィルムの視覚化によってchromogenic 検出方法が利用されれば検出される。
(ステップ3 のためのノート: 従ってkb がサイズにあるかもしれないより15 のより小さい部分にDNA を壊すしみが付く前のHCl のdilute 酸をそれまでにdepurinated 大きいDNA のフラグメントが非常にあれば、ゲルからの膜へのより有効な転送を許可する。アルカリ転送方法が使用されれば、double-stranded DNA を変化させるためにDNA のゲルは(普通ナトリウム水酸化物を含んでいる) アルカリ解決に置かれる。アルカリ環境の変性はプローブにより遅い交配のための単一のDNA の繊維にpositively-charged 膜にnegatively-charged DNA の改良された結合を、分けそれを(次に見なさい) 、破壊するまだDNA にあるかもしれない残りのRNA を提供する。
音声部分: 詳しい南しみの説明を聞きなさい! 礼儀: 各国用の人間のゲノムの研究所。
述べられるように、南しみはプローブと呼出されるDNA の別の部分に補足のDNA シーケンスを識別し、見つけるのに使用される技術である。
膜に部分的にendonucleases によって消化されるgenomic または補足のDNA のシーケンスまたはフラグメントの電気泳動のゲルの分離が、フラグメントそして' しみが付き、' どのバンドが興味のフラグメントか遺伝子を含んでいるか検出するためにプローブと分類される細目と交配させる。南しみは大きい遺伝子rearrangements/deletions および大きいtrinucleotide の繰り返しの拡張の検出に特に有用である。
南しみはDNA のサンプルのDNA シーケンスの存在があるように確認するのに定期的に分子生物学で使用される方法である。プローブの交配のためのフィルター膜にサイズ分けられたDNA を転送するために南にしみが付くことは方法とDNA のサイズ分離のためのagarose のゲルの電気泳動を結合する。他のしみが付く方法(すなわち、西部のしみ、北のしみ、南西しみ) 同じような主義を用いる、RNA か蛋白質を使用することは、後で南名前とについて指名されたが。技術がeponymously 指名されたので、南しみは北及び西部のしみがべきでない一方大文字で書かれているべきである。
また制限のフラグメントの分子量を定め、異なったサンプルの相対的な量を測定することを使用する。
しみはキャリアにDNA 及びRNA 蛋白質を転送する為の技術である従って分けることができ頻繁にゲルの電気泳動の使用に続く。南しみはDNA を転送する為に使用される。
フィルター膜の特定のDNA のフラグメントへのプローブの交配はこのフラグメントがプローブに補足であるDNA シーケンスを含んでいることを示す。
南しみは遺伝子の発見を含む複数の主要な領域で及び、進化及び開発の調査マップ、診断およびforensics 使用される。
最適の条件の下で、南にしみが付くことは興味のDNA の~ 0.1 のページを検出する
20X SSC バッファの1 リットルを作るためには、次を追加しなさい:
問題及びトラブルシューテ-ィングの南にしみが付くことのために、南しみが付くフォーラムでそれを論議するために新しい 糸を掲示しなさい!
制限の酵素の消化力 - あなたが知る必要があるすべて!
友人にこのページを送りなさい
![[أربيك]](http://www.molecularstation.com/translate/images/flag_ar.gif){kind=small}
