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版権2007の分子端末
南しみが付くことは発明家および開発者のエドウィンM. 1975年に南イギリスの生物学者の名にちなんで名付けられる技術である。 南しみが付くことはDNA (例えば細胞DNA)の大きく、複雑なサンプルの特定のDNAシーケンスの検出を(遺伝子または他)可能にする技術である。
「PCRの前に安く絶食し、変更した遺伝学である宇宙の私達の眺めを、南しみはだったユニバーサル役馬配列する。 いずれ南しみを用いなかった分子遺伝学に実験がなかった。 それは今でも役に立つツールであり」。履歴データを解読できるようにそれについて確認する必要がある
南しみの技術の図表。図は版権である。 講議または科学のプロジェクトのためにそれを使用するために望んだら許可のための私達に連絡しなさい。
ステップ1では、DNAは制限のendonucleasesと消化される。 高分子量DNAはより小さいフラグメントに消化される。
ステップ2では、DNAはagaroseのゲルの電気泳動によるサイズでそれから分かれている。
ステップ3では、ナイロンまたは硝酸セルロースの膜のシートは(紫色)バッファ解決にagaroseのゲルの上に置かれる。 これはしみが付くか、または転送段階考慮される。 圧力はゲルに吸引を使用してまたは膜およびゲルの上にペーパータオルのスタックおよびゲルと膜間の接触を保障するために重量を置くことによって均等に適用される。 最高潜在性の領域からの干潮潜在性の領域への毛管処置によるバッファ転送が(通常フィルターペーパーおよびペーパーティッシュ)それから膜にゲルからDNAを進むのに使用されている。 DNAが負荷電DNAと正荷電の膜間のイオン相互作用によって膜に高い親和性と結合するようにする正荷電の膜は(紫色)通常使用される。
ステップ4では、硝酸セルロースの膜は高温への露出によって焼ける(60から100から°C)。 ナイロン膜は紫外線放射--にさらされる。 これらのステップが膜にバンドで現在のDNAの常置および共有架橋結合を保障するのに使用されている。
ステップ5では、膜はradiolabeledプローブ--にさらされる。 このプローブはあなたが検出したいと思う興味のシーケンスがあるsingle-stranded DNAのフラグメントである。 膜によってこのプローブが孵化し、膜のDNAと交配させる。 プローブは通常蛍光かchromogenic染料のような非放射性のより新しいプローブがまた使用されるどんなにフィルムで検出されるようにradiolabeledである。 交配の後で、余分で自由なプローブはとりわけ区切られたプローブを去る膜から洗い流される。
ステップ6では、交配のパターンは放射性か蛍光プローブの場合には放射線写真法、または膜のカラーの開発によるX線フィルムの視覚化によってchromogenic検出方法が利用されれば検出される。
(ステップ3のためのノート: 従ってより15 kbがより小さい部分にDNAを壊すしみが付く前にそれまでにdepurinated希薄なHClの酸であるかもしれない大きいDNAのフラグメントが非常にあれば、ゲルからの膜へのより効率的な転送を許可する。 アルカリ転送方法が使用されればdouble-stranded DNAを変化させるために、DNAのゲルはアルカリ解決に(普通水酸化ナトリウムを含んでいる)置かれる。 アルカリ環境の変性は正荷電の膜に負荷電DNAの改良された結合を提供し、より遅い交配のための単一DNAの繊維にプローブの（下記参照）にそれを分け、そしてまだDNAにあるかもしれない残りのRNAを破壊する。
音声: 詳しい南しみの説明を聞きなさい! 礼儀: 各国用の人間のゲノムの研究所。
述べられるように、南しみはプローブと呼出されるDNAの別の部分に補足のDNAシーケンスを識別し、見つけるのに使用される技術である。
膜に部分的にendonucleasesによって消化されるgenomicまたは補足DNAのシーケンスまたはフラグメントの電気泳動のゲルの分離が、フラグメントそして「しみが付き」、どのバンドが興味のフラグメントか遺伝子を含んでいるか検出するためにプローブと分類される細目と交配させる。 南しみは大きい遺伝子語順換えのか削除および大きいtrinucleotideの繰り返しの拡張検出に特に有用である。
南しみはDNAのサンプルのDNAシーケンスの存在があるように確認するのに定期的に分子生物学で使用される方法である。 南しみが付くことは方法とプローブの交配のためのフィルター膜にサイズ分けられたDNAを転送するためにDNAのサイズ分離のためのagaroseのゲルの電気泳動を結合する。 他のしみが付く方法(すなわち、西部のしみ、北のしみ、南西しみ)同じような主義を用いる、RNAか蛋白質を使用することは南名前について、後で指名されたが。 技術が名祖として指名されたので、南しみは北および西部のしみがべきではない一方大文字で書かれているべきである。
また制限のフラグメントの分子量を定め、異なったサンプルの相対的な量を測定することを使用する。
しみはキャリアにDNAおよびRNA蛋白質を転送するための技術である従って分けることができ頻繁にゲルの電気泳動の使用に続く。 南しみはDNAを転送するために使用される。
フィルター膜の特定のDNAのフラグメントへのプローブの交配はこのフラグメントがプローブに補足であるDNAシーケンスを含んでいることを示す。
南しみは遺伝子の発見を含む複数のメインエリアでおよび、改革および開発の調査マップ、診断および討論使用される。
最適の条件の下で、南しみが付くことは興味のDNAの~ 0.1のページを検出する
20X SSCバッファの1リットルを作るためには、次を追加しなさい:
問題およびトラブルシューティングの南しみが付くことのために、南しみが付くフォーラムでそれを論議するために新しい糸を掲示しなさい!
制限の酵素の消化力-あなたが確認する必要があるすべて!
