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Agarose の浄化のDNA のフラグメント

版権2007 の分子端末

Agarose のプロトコルからのDNA のフラグメントの浄化

1. "低い溶解" のagarose のゲルの実行のDNA 。
2. 5kb use1% への600bp DNA のフラグメントのため; 300- 700bp 使用の2% agarose のため。走る必要があればより小さいフラグメントは2% を"" 低い溶解"Nusieve" + 1% 使用する。
3. バンドが分かれた後、紫外線ボックスのバンドを視覚化しなさい(紫外線へのDNA の露出を最小にしなさい)
4. バンドを切りなさい(ライトボックスで紫外線フィルターを! スクラッチしてはいけない) 。
5. バンド、クラッシュ、およそのための65.oC への熱にT.E. バッファ(10mM Tris-HCl pH 7.6 、1mM のEDTA) の100 つのUL を追加しなさい。5 分は、フェノール、渦、3 min. の渦の熱65.C の200l を追加する。
6. Microfuge は5 分、supernant 除去する
7. フェノールにT.E. の100 つのl 、渦、熱65.C を渦3 min. の追加しなさい
8. Microfuge のプールのsupernants 。
9. クロロホルムのエキス(microfuge 、およそ400 のUL) 3 分。
10. 1/10 のVol. 3M Na0Ac 、2.5 のVol. を追加するEtOH の沈殿物。EtOH 。
11. -20.C 1-2+hrs; 回転は適したVol. 0.1X T.E を30 min. 、持って来る乾燥する。

DNA のAgarose のためのヒントによっては浄化がゼリー状になる

• 長い紫外線波長セットしなさい(または低電力) にTRANS 照明器を。これは紫外線DNA の露出のそしてエネルギー時間を最小にする大きい方法である。これはDNA の紫外線突然変異誘発を最小にする。
• トリムDNA を取除かないで可能バンドからのagarose のその位。これはDNA の浄化を高める最小になるagarose の汚染で助ける。
• 得れば問題は使用の商業キットがのような回るcolumns.There それらをできることができればDNA を得る為のある優秀なキット帰宅している。これらはQiagen 、シグマ、および他の会社からのキットを含んでいる。

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