細菌のGenomic DNAの隔離のプロトコル

BateriaのプロトコルからのGenomic DNAの隔離

トリトンの浄化を使用して細菌からのgeneomic DNAの隔離のための準備方法

何人かのコロニーを育てなさい-文化を位取りし15mlなさい大きい。
ボリュームによって単一のeppendorfの管か15のmlの使い捨て可能な管にセルを収穫しなさい。
300ul STETバッファ(900ul)が付いている餌を再停止しなさい。
再停止の後で30ul RNaseまたはリゾチームの混合物(100ul)を追加しなさい。
1分のための餌を45秒) 15秒(1分沸かしなさい。
15分のmicrofugeで回しなさい。
150ul (500ul) STET-によって飽和させるフェノールが付いている上澄みおよびフェノールのエキスを取りなさい。
上澄みを回し、取りなさい。 1/10のボリューム4Mリチウム塩化物を追加しなさい(オートクレーブに入れられる)。 5-10分の氷で置かれるために割り当てなさい。
上澄みを回し、取りなさい。等しいボリュームイソプロパノールを追加しなさい。 5分のRT。
回転。餌は目に見えない。、DNAは管の上でずっと味方するためにスタックするパニックに陥らない。
重要: 80%のエタノールが付いている洗浄(95%により残余トリトンは沈殿する)
50-200ulの餌を再停止しなさい。
リゾチームのRNaseの混合物10mg/mlのリゾチーム1mg/mlのRNase (余りに高いRNase Aよりもむしろ使用の安い等級(BMB)、) 50mMの小さい因数の-20oCのTrisHCl pH8.0記憶装置。分解の後で再冷凍してはいけない。
STET 8%のサッカロース5%トリトンX-100 50mM TrisHCl (pH8.0) 50mMのEDTA pH 8.0はろ過殺菌する。 4oCの記憶装置