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科学、ほとんどの発見を予告する1 で聞くべき最も刺激的な句は、でない"Eureka!" (私はそれを! 見つけた) しかし"おかしい..." ~Isaac Asimov である
ここのセル換散の技術の情報。
セル換散か細胞中断はセルの中から細胞器官、蛋白質、DNA 、RNA および脂質を含む生物的分子のリリースのための細胞生物学方法である。
ほとんどのセルのための、穏やかな浸透はlyze へ十分に通常セルである。これは周囲の解決のイオン強さの低下によってされ、膨れるためにセルおよび内容を解放する破烈を引き起す。
穏やかなsurfactans は頻繁に機械換散方法に加えて使用される。
機械か物理的な換散方法は下記のものを含んでいる:
完全保障するためにこれらのステップはorganellar 及び核膜の故障を含むセルそして細胞コン�&ーネントの分離する行なわれる。
セルを育てる高い費用のために、通常唯一に少しの細胞材料は使用できる。セルを分離させるとき使用可能な材料の最高値を保障することは有効であることはこうして必要得られるである。ほとんど完全な換散を保障するのに頻繁に、組合せで複数の方法が使用されている。
セル換散はセルからのDNA 、RNA および蛋白質の抽出のために重大である。従って、それはほとんどの細胞生物学の技術および分子生物学の技術で必要とされる。
セル換散は使用法でセル膜および解放されるべき細胞含有物が穴を開けられるように要求すると同時に限定される。これらの分離させたセルは死に、再度�&養されるか、または育つことができない。
使用するべきどのセル換散方法をまたはそれをか行なう方法を考慮する多くの要因がある。
分離するべきセルの量はセル換散の重要なパラメータである。非常にあればただ
サンプルの唯一に少数のマイクロリットルが使用できれば、損失を最小にし、cross-contamination を避けるために心配は取られなければならない。
何百かたくさんもの材料のリットルが生産環境で処理されているとき、セルの中断は別の挑戦を示す。スループット、効率、および再現性は主要因である。
lyze へ多くのセルサンプルが頻繁にある。サンプルのクロス汚染を含んでこれを、処理の速度して、および各サンプルの後の装置のクリーニングがいつ分離するか考慮する多くの問題がある。
あるセルは分離しかなりにくい。換散の難しさが増加すると同時に、効率的にセルを破壊するためにバッファのより大きい換散力かより高いイオン強さは必要となる。
イーストサンプルのようなセルサンプルのより困難な換散のため、必要な処理のパワー、時間および費用に急増がある。
lyze への最も困難なサンプルのために、細菌の胞子のような、これらは化学か酵素の努力と結合される機械力を必要とする。問題は多重と均一であり、より粗い方法、通常1 は限られた中断の効率を達成する。
セルのどんな部分によって、細胞器官はまたは隔離する必要性に換散望ましいプロダクトに影響を与えるかもしれない小分けする。
細胞レベル下の分別が使用されれば、そのままな細胞レベル下の細胞器官のコン�&ーネントを達成する敏感な換散を持っていることは重要である。明らかに、換散の低い効率を達成し、こうしてより多くのセルを必要とする。これらのセル換散のprocessesses を位取りするためには、セルを破壊する時期および方法の再現性はより重要な要因になる。
あなたが隔離されて必要とする蛋白質に食料調達することは非常に重要換散方法である。それが核蛋白質、セルを最初に分離させ、次に核膜を隔離するために必要とされる気遣いなさい。核膜が隔離された後、そして1 つは核膜を分離させ、興味の分子を解放するかもしれない。この方法は他の細胞compartments/organelles からある分子の汚染を減らす。
なお、分子によって心配は使用かない使用のある換散解決または方法に取られなければならない。例えば、ホスファターゼに敏感であるリン蛋白質を隔離することを試みれば、それはたくさん…のプロテアーゼ及びホスファターゼの酵素にリン蛋白質を分離させ、さらすよい考えでない。粗いか酵素の条件から分子を保護することは重要である。温度(換散の低温) 、および抑制的な分子の使用法は(プロテアーゼ及びホスファターゼの抑制剤のような) これらの換散のケースで重要である。
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