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protocollo di Transfection di siRNA

 protocollo di transfection di siRNA: Transfect 6 piastre buone

1. applichi il primo trattamento di siRNA quando le cellule sono 60% confluent (confluency di misura con il voltmetro); placchi le cellule 1.5x10^6 il venerdì, transfect il mercoledì. Per ciascuno pozzo:

1. Dilua un siRNA di 2.5 ug (20uM sono approssimativamente 0.26ug/ul. UL 9.62 per bene di una piastra 6-well) con i terreni di coltura ad un volume finale dell'UL 100. Puntedella pipetta della barriera dell'esperto in informatica di U. Potete fare una miscela matrice se tutti i pozzi saranno transfected con lo stesso siRNA. Faccia questo in un tubo di plastica sterilizzato nell'autoclave sterile.
2. Aggiunga 12 l'UL RNAiFect (Qiagen - o qualunque altro reagente di transfection del RNA, vede il protocollo del fornitore) per il tubo del mastermix di siRNA e mescoli delicatamente.
3. Incubi per 15 minuti alla temperatura ambiente per permettere la formazione complessa fra il siRNA ed i lipidi.
4. Aspiri i media dalle cellule ed aggiunga i media freschi 900ul a ciascuno bene.
5. Aggiunga la miscela di siRNA (UL 112 per il pozzo) a goccia a goccia mentre piastra delicatamente di turbine.
• Applichi più successivamente il secondo trattamento di siRNA 2 giorni, dopo i punti descritti sopra. Il secondo transfection aggiungerà all'espressione di diminuzione del gene di interesse.

Altri protocolli di siRNA

Inoltre veda il nostri siRNA e pagina di RNAi


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