transfezione del siRNA

protocollo di transfezione del siRNA

 protocollo di transfezione del siRNA: Transfect 6 piatti buoni

1. applichi il primo trattamento del siRNA quando le celle sono 60% confluenti (confluency di misura con il voltmetro); placchi le celle 1.5x10^6 il venerdì, transfect il mercoledì. Per ciascuno pozzo:

1. Diluisca 2.5 ug del siRNA (20uM è approssimativamente 0.26ug/ul. UL 9.62 per bene di un piatto dei 6 pozzi) con i terreni di coltura ad un volume finale di UL 100. Usi le punte della pipetta della barriera. Potete fare una miscela matrice se tutti i pozzi transfected con lo stesso siRNA. Faccia questo in un tubo di plastica sterilizzato nell'autoclave sterile.
2. Aggiunga 12 l'UL RNAiFect (Qiagen - o qualunque altro reagente di transfezione del RNA, vede il protocollo del fornitore) per tubo del mastermix del siRNA e mescoli delicatamente.
3. Incubi per 15 minuti alla temperatura ambiente per permettere la formazione complessa fra siRNA ed i lipidi.
4. Aspiri i media dalle celle ed aggiunga i media freschi 900ul a ciascuno bene.
5. Aggiunga la miscela del siRNA (UL 112 per pozzo) a goccia a goccia mentre piatto delicatamente di turbine.

• Applichi più successivamente il secondo trattamento del siRNA i 2 giorni, dopo i punti descritti sopra. La seconda transfezione aggiungerà all'espressione di diminuzione del gene di interesse.

Altri protocolli del siRNA

Inoltre vedi il nostri siRNA e pagina di RNAi