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Nel Protocollo Di Digestione Della Tripsina Del Gel

Che cosa è esattamente nella digestione della tripsina del gel? Impari circa nella digestione della tripsina del gel e nella procedura per in digestione della tripsina del gel.

Digestione della tripsina delle fette del gel: Un'Introduzione

L'elettroforesi del gel di poliacrilammide è una procedura comune del laboratorio seguita per separare le proteine in campioni biologici complessi. Lo sviluppo (della 2D) elettroforesi bidimensionale del gel ha fornito un metodo differentialy alle proteine della visualizzazione permettendo l'analisi quantitativa di molte centinaia alle migliaia delle proteine contemporaneamente. Analizzando le differenze nei 2D modelli del gel fra controllo e le circostanze sperimentali, si può ora determinare gli effetti sull'espressione delle proteine e sulla sintesi delle proteine del romanzo in determinati termini quale cancro.

La digestione trittica dei peptidi direttamente in gel di poliacrilammide affetta il protocollo 

Spieghiamo nel seguente articolo come direttamente digerire le proteine che sono state fatte funzionare su un gel di poliacrilammide ed essere macchiato con Coomasie. Digerendo la proteina all'interno del gel, eliminate la necessità di eluire la proteina dalle fette della fascia del gel o di trasferire la proteina di interesse ad una membrana nitrocellulosa/di PVDF.

Questo protocollo non usa alcuni detersivi che permette un'analisi diretta del nella digestione della proteina del gel tramite spettrometria totale di cromatografia a fase mobile liquida (LC-MS) senza frazionamento di HPLC.

  Il limite di segnalazione delle proteine che sono in-gel di digestione è circa 1 pmol di proteina. Poichè il coomasie che macchia ha un limite di segnalazione simile, è conosciuto che una fascia macchiata coomasie debolmente macchiata è abbastanza da rilevare tramite spettrometria totale.

  Shevchenko ed altri hanno pubblicato la digestione di analisi del gel macchiata argento tramite spettrometria totale nanospray e questo protocollo è basato su quel protocollo.

Nei Riferimenti Di Digestione Del Gel:

A. Shevchenko, M. Wilm, O. Vorm e M. Mann. Ordinare spettrometria totale delle proteine dai gel di poliacrilammide argento-macchiati. Chemica Analitica 68:850-858 (1996).