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Membrane Occidentali Mettenti a nudo Della Macchia

Le informazioni del ritrovamento su come mettere a nudo le membrane occidentali della macchia qui.

Indice mettente a nudo della membrana occidentale della macchia

• Che cosa la membrana sta mettendo a nudo?
• Priorità bassa
• Applicazioni
• Materiali
• Amplificatori
  
• Preparazione
• Protocollo
• Visualizzazione
• Analisi Del Gel
• Macchia Occidentale Che Mette a nudo Videos - Venendo Presto!
• Altri Protocolli Mettenti a nudo Della Macchia Occidentale
• Mettere a nudo d'analisi guasti della membrana
• Soggetti di discussione per le macchie mettenti a nudo
• Ottenga l'aiuto sul vostro mettere a nudo della membrana

Che cosa la membrana sta mettendo a nudo?

Mettere a nudo della membrana è la rimozione degli anticorpi (primario e secondario compresi) da una membrana occidentale della macchia, permettere l'incubazione di nuovi anticorpi primari e secondari per l'analisi di nuova proteina dal macchiarsi occidentale.

 

 

Applicazioni di mettere a nudo occidentale della macchia

L'elettroforesi del gel dell'agarosi pricipalmente è usata nell'analisi o nella separazione delle molecole del RNA e del DNA (anche se le proteine possono anche essere separate sui gel dell'agarosi), comunque la separazione egualmente permette la purificazione dei formati specifici di DNAs dopo digestione degli enzimi di limitazione. Ciò è usata solitamente nella clonazione per ottenere i plasmidi del taglio, in cui l'elettroforesi del gel dell'agarosi separa i vettori del taglio da quei non tagliati.

Così mettere a nudo concede:

1. La riutilizzazione delle membrane occidentali della macchia da analizzare per l'espressione di un'altra proteina
2. All'analisi per proteina totale
3. Per analizzare per la proteina non-fosforilata (dopo avere analizzato per la proteina fosforilata).

 

 

Amplificatori Mettenti a nudo Della Membrana

Mettere a nudo richiede gli amplificatori e l'incubazione speciali in un forno.

Amplificatori Usati:

Amplificatore Mettente a nudo

• 62.5 millimetri Tris-HCl (pH 6.8)
• 2% SDS. (aggiunga l'UL 280 del merceptoethanol 2-beta o di una concentrazione finale di 0.1 m. 2-Mecaptoethanol).

Protocollo Mettente a nudo

• aggiunga 280 μl di 2-beta-mercaptoethanol per 40 ml di amplificatore mettente a nudo (ad una concentrazione finale di 100 millimetri)
• 1. Lavi la membrana in TBST (1 x 5 minuti)
  2. Incubi la membrana nell'amplificatore mettente a nudo per 30 minuti a 50-60°C (usi un forno del heating per questo - e mantenga il chiuso del portello del forno dovuto l'odore)
  3. Lavisi in TBST (2 x 5 minuti)
  4. Ostruisca la membrana per 1 h in latte ostruente di 5%
  5. Segua il protocollo normale per sviluppare le macchie occidentali.

 

 

 

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