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Concentrazione Nella Proteina

Determinazione della proteina da assorbimento del UV

Vicino A Capacità di assorbimento UV

Vicino a capacità di assorbimento UV è la capacità di assorbimento UV a 280 nm: Uno spettrometro semplice può misurare la quantità di proteina in una soluzione.  L'assorbimento di radiazione dalle proteine nel UV vicino dipende dal contenuto di Tyr e del TR (ed in misura sulla quantità di Phe e di legami bisolfurico). Così il A280 varia notevolmente fra le proteine differenti (per una 1 soluzione di mg/mL, da 0 fino a 4 [ per alcune proteine tirosina-ricche delle lane ], anche se la maggior parte dei valori sono nella gamma 0.5–1.5). Questo metodo presenta i relativi vantaggi; è semplice ed il campione è ricuperabile. Sia quello come può esso egualmente presenta gli svantaggi che includono, interferenza da altri cromofori ed il valore specifico di assorbimento per una data proteina deve essere determinato. L'estinzione di acido nucleico nella regione 280-280-nm può essere fino a 10 volte che di proteina alla loro stessa lunghezza d'onda e quindi, alcuni percento di acido nucleico possono notevolmente influenzare l'assorbimento.

Capacità di assorbimento UV Lontana

L'assorbimento del legame del peptide è fortemente lontano nel UV con un massimo a circa 190 nm che   l'assorbimento forte delle proteine a queste lunghezze d'onda è stato usato nella determinazione della proteina. A causa delle difficoltà causate da assorbimento da ossigeno e dall'uscita bassa degli spettrofotometri convenzionali a questa lunghezza d'onda, le misure sono effettuate più convenientemente a 205 nm, dove la capacità di assorbimento è circa la metà quella a 190 nm. La maggior parte delle proteine hanno coefficenti di estinzione a 205 nm per una 1 soluzione di mg/mL di 30–35 e fra 20 e 24 a 210 nm.  Le varie catene laterali, compreso quelle di Trp, Phe, Tyr, suo, Cys, hanno venuto a contatto di ed Arg (in quanto ordine discendente), dà i contributi al A205. I vantaggi di questo metodo includono la semplicità e la sensibilità. Il campione è ricuperabile ed in più ci è poca variazione nella risposta fra le proteine differenti, così consentendo la determinazione vicino-assoluta di proteina. Gli svantaggi di questo metodo includono la necessità per la calibratura esatta dello spettrofotometro lontano nel UV. Molti amplificatori ed altri componenti, quali i gruppi del piradossale o del heme, assorbono fortemente in questa regione.

Veda inoltre i nostri protocolli di protocollo di concentrazione nella proteina e di concentrazione nella proteina da altri laboratori.

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