Benvenuto alla stazione molecolare!

Dovete registrare prima che possiate inviare sulle nostre tribune o usare le nostre caratteristiche avanzate. Registro Ora! Il relativi libero e veloce!

Già registrato? Inizio attività ora sotto.

Nome Dell'Utente:

Parola d'accesso:

Selo ricordi di?

Già registrato ed ha dimenticato la vostra parola d'accesso? Scatto qui sotto per recuperarlo.

Recuperi La Parola d'accesso Persa

Ora uniscasi - è veloce e libera!

La stazione molecolare è la più grande rete dei ricercatori, degli scienziati e degli amanti di scienza dovunque!

Alberini Recenti Della Tribuna

 

Protocolli Della Proteina

Enciclopedia Della Proteina

Proteina Bioinformatics

Tribuna Di Scienza Della Proteina

Proteina Blog

Notizie del DNA

 

Determinazione della proteina dal protocollo di assorbimento del UV

Determinazione della proteina dal protocollo di assorbimento del UV, (modificato dal protocollo da Alastair Aitken e da Michèle P. Learmonth)

Materiali per concentrazione UV nella proteina

1. 0.1 M. K2SO4 (pH 7.0).
2. soluzione tampone a base di fosfato del potassio da 5 millimetri, pH 7.0.
3. Detersivo non ionico (0.01% Brij 35)
4. Guanidinium-HCl.
5. filtro del millipore di 0.2-µm (Watford, Regno Unito).
6. spettrometro Uv-visibile: La lampada dell'idrogeno dovrebbe essere selezionata per intensità     massima
alla lunghezza d'onda particolare.
7. Cuvets, quarzo, per < 215 nm.

Metodo UV Di Concentrazione Nella Proteina

 Valutazione di proteina da capacità di assorbimento del Near UV (280 nm):

1. Uno spettrofotometro certo è necessario. La soluzione della proteina deve essere diluita in
l'amplificatore ad una concentrazione che è in conformità alla gamma esatta dello strumento (vede le note 1 e 2).

2. La soluzione della proteina da misurare può essere in una vasta gamma degli amplificatori, in modo da è solitamente problema per trovare uno che è adatto per la proteina che può già essere in un amplificatore particolare richiesto per un punto o un'analisi di purificazione per attività dell'enzima, per esempio (veda le note 3 e 4).

3. Misuri la capacità di assorbimento della soluzione della proteina a 280 nm, usando i cuvets del quarzo o i cuvets che sono conosciuti per essere trasparenti a questa lunghezza d'onda, riempiti di volume della soluzione sufficiente per coprire l'apertura attraverso cui il raggio di luce passa.

4. Il valore ottenuto dipenderà dalla lunghezza del percorso del cuvet. Se non 1 centimetro, deve essere
registrato dal fattore adatto. La legge della Birra-Lambert dichiara quella: A (capacità di assorbimento) = ε c l dove ε = il coefficente di estinzione, la c = la concentrazione in mol/L e l = lunghezza del percorso ottica nel centimetro di conseguenza, se ε è conosciuto, misura di A dà direttamente la concentrazione, ε è
citato normalmente per una lunghezza del percorso di çentimetro.

5. Il valore reale di capacità di assorbimento UV per una data proteina deve essere determinato con un certo metodo assoluto, per esempio, calcolato dalla composizione in amminoacidi, che può essere determinata da analisi dell'amminoacido. La capacità di assorbimento UV per una proteina allora è calcolata secondo la seguente formula: A280 (1 mg/mL) = (5690nw + 1280ny + 120nc)/M
di dove il nanowatt, ny ed il nc sono i numeri di residui di Trp, di Tyr e di Cys nel polipeptide
la massa m. e 5690, 1280 e 120 è i coefficenti rispettivi di estinzione per questi residui (veda la nota 5).

Veda inoltre i protocolli di concentrazione nella proteina da altri laboratori.

Altri Articoli Della Proteina:

Macchia Occidentale Domestica

Immunoprecipitazione Domestica

Elettroforesi Del Gel di SDS-PAGE

Separazione Della Proteina

Purificazione Della Proteina

Identificazione Della Proteina

Sistemi Recombinant Di Espressione Della Proteina

Tecniche Di Espressione Della Proteina