Benvenuto alla stazione molecolare!

Dovete registrare prima che possiate inviare sulle nostre tribune o usare le nostre caratteristiche avanzate. Registro Ora! Il relativi libero e veloce!

Già registrato? Inizio attività ora sotto.

Nome Dell'Utente:

Parola d'accesso:

Selo ricordi di?

Già registrato ed ha dimenticato la vostra parola d'accesso? Scatto qui sotto per recuperarlo.

Recuperi La Parola d'accesso Persa

Ora uniscasi - è veloce e libera!

La stazione molecolare è la più grande rete dei ricercatori, degli scienziati e degli amanti di scienza dovunque!

Alberini Recenti Della Tribuna

Luogo Del Bookmark Del Bookmark

Analisi Della Proteina De Bradford

Determinazione di concentrazione nella proteina dall'analisi de Bradford

Una procedura semplice per la determinazione di concentrazione nella proteina nelle soluzioni è l'analisi della proteina de Bradford che è stata descritta in primo luogo da Bradford (Bradford ed altri, 1976).

Una valutazione di concentrazione nella proteina è essenziale per essere fatto velocemente ed esattamente in molti campi dello studio della proteina. L'analisi de Bradford si è transformata in nel metodo preferito per la misura della proteina in molti laboratori. Questa tecnica è più semplice, più velocemente e più sensibile del metodo di Lowry. Ancora, in paragone al metodo di Lowry, è conforme a meno interferenza dai reagenti comuni e dai componenti senza proteine dei campioni biologici.

L'analisi de Bradford conta sul grippaggio della tintura Coomassie G-250 blu a proteina.

Gli studi dettagliati indicano che la tintura libera può esistere in quattro forme ioniche differenti per cui i valori di pKa sono 1.15, 1.82 e 12.4. Delle tre forme caricate della tintura che predominano nella soluzione silicea del reagente di analisi, nelle forme rosse e verdi più cationiche abbia massimi di capacità di assorbimento a 470 nm ed a 650 nm, rispettivamente. In opposizione, la forma blu più anionica della tintura, che si lega a proteina, ha un massimo di capacità di assorbimento a 590 nm.

Quindi, la quantità di proteina può essere valutata determinando la quantità di tintura nella forma ionica blu. Ciò è realizzata solitamente misurando la capacità di assorbimento della soluzione a 595 nm.

La tintura sembra legarsi il più prontamente al arginyl ed ai residui lysyl di proteine. Questa specificità può condurre a variazione nella risposta dell'analisi alle proteine differenti, che è lo svantaggio principale del metodo. L'analisi de Bradford di originale mostra la grande variazione nella risposta fra le proteine differenti. Parecchie modifiche al metodo sono state sviluppate per superare questo problema.

Tuttavia, questi cambiamenti provocano generalmente un'analisi meno robusta che è spesso più suscettibile di interferenza da altri prodotti chimici. Di conseguenza, il metodo originale inventato da Bradford rimane la formulazione più conveniente ed ampiamente più usata. Due tipi di analisi sono descritti qui: l'analisi standard, che è adatta a misurazione fra il µg 10 e 100 di proteina e la microanalisi, che rileva fra µg 1 e 10 di proteina. Il posteriore, anche se più sensibile, è egualmente più incline ad interferenza da altri residui a causa della quantità più grande adi reagente relativo della tintura del campione in questa forma dell'analisi.

veda inoltre: Protocollo Di Analisi Della Proteina De Bradford

Riferimenti Di Metodo De Bradford

Bradford, Anale. Biochimica. 72: 248. 1976.

 

Protocolli Della Proteina

Enciclopedia Della Proteina

Proteina Bioinformatics

Tribuna Di Scienza Della Proteina

Proteina Blog

Notizie del DNA