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Tipi di proteina Microarray e di circuiti integrati dell'anticorpo

Proteina ed anticorpo Microarrays

Circuiti integrati della proteina ed anticorpo Microarrays - lastre di vetro, Microwell/Nanowell

            Due formati importanti del circuito integrato della proteina ora sono usati, compreso le lastre di vetro ed i nanowells (8.27).  dovuto i grandi importi dei metodi di aderenza dello scorrevole soltanto i tipi più comuni e più principali saranno accennati qui.
            È importante che i circuiti integrati della proteina mantengono le proteine in un attivo dichiarano alle alte densità, sono compatibili con la maggior parte di arrayers e dei dispositivi d'esplorazione commerciali e possono essere stampati ad un tal modo che le proteine rimangono in un ambiente moisturized (8.27). (Si veda Figura 2).

Circuiti integrati Della Lastra Di Vetro
Le lastre di vetro presentano il vantaggio che sono compatibili con apparecchiatura microarray standard e l'apparecchiatura di rilevazione utilizzate per i circuiti integrati del DNA.  Sono egualmente economiche.  La maggior parte degli studi ora sta usando le lastre di vetro.  Tuttavia, hanno un alto tasso di evaporazione e sono suscettibili di contaminazione trasversale possibile (8.27). 
            Le prime strategie per la creazione degli allineamenti della proteina su vetro sono state sviluppate da Mirzabekov ed altri.  Gli allineamenti sono stati prodotti dalle proteine d'immobilizzazione in tasche molto piccole del gel che sono state fissate alla superficie di vetro.  Una varietà di immunoassays, la rilevazione dell'antigene e le analisi enzimatiche sono state effettuate.  dovuto la struttura della tabella 3D, immobilizzazione della proteina era molto efficiente (28-30). 
In un altro studio, le proteine sono state fissate ad una superficie di vetro attivata con un agente unente con legami atomici incrociati che reagisce con le ammine primarie (31).  Le proteine sono state macchiate in una soluzione del glicerolo di 40% che mantiene le proteine in un ambiente bagnato ed impedisce la disidratazione.  Per determinare che i loro microarrays della proteina fossero fattibili per le analisi biochimiche, hanno verificato tre interazioni conosciute della proteina-proteina, tre reazioni conosciute del chinasi-substrato e tre interazioni conosciute della proteina-ligand usando le proteine fluorophore-etichettate, il trifosfato di adenosina radioattivo ed i ligands sintetici accoppiati all'albumina fluorescently identificata del siero di bue (BSA), rispettivamente.  In la maggior parte degli esperimenti, un piccolo numero di proteine sono state macchiate tuttavia in un esperimento che hanno identificato un singolo punto all'interno di un allineamento di 10.000 punti che contengono altra una proteina.  Questo lavoro ha dimostrato il potenziale dei microarrays della proteina nelle analisi biochimiche su grande scala tuttavia che il loro studio ha analizzato un numero molto piccolo di proteine e le attività del romanzo non sono state identificate.
Un altro studio ha usato le lastre di vetro per la rilevazione di parecchi antigeni della proteina.  I analytes sono stati macchiati su una superficie di vetro trattata ad alta densità per mezzo di un dispositivo dimacchia o di un robot microarray.  I analytes macchiati sono stati rilevati usando gli anticorpi fissati ad un iniettore del oligonucleotide e ad una reazione di amplificazione del cerchio di rolling.  La tecnica ha avuta un'alta sensibilità, una gamma dinamica larga e riproducibilità eccellente del punto-$$$-PUNTO
(32).
La maggior parte dei gruppi ora direttamente allineano le proteine e gli anticorpi sulle lastre di vetro normali (31.33-35) e sulla macchia è effettuato in un ambiente umidità-controllato (8).

Circuiti integrati Di Microwell/Nanowell
            Compatibile con l'allineamento standard di rilevazione e microarray dell'apparecchiatura tuttavia è richiesto.  Questo metodo è versatible per le analisi e le reazioni soluzione-basate del multiplo-componente.  L'evaporazione è ridotta e non ci è contaminazione trasversale.  Egualmente questi circuiti integrati sono relativamente economici (8.27).
Zhu ed altri, fabbricati una struttura aperta, vale a dire nanowells su una superficie del polydimethylsiloxane (PDMS) sostenuta tramite le lastre di vetro standard (36). 
Questi circuiti integrati consistono di un allineamento dei microwells in un elastomero a gettare del silicone, il poly(dimethylsiloxane) (PDMS) (37). Gli allineamenti di Microwell permettono che i piccoli volumi dei analytes differenti siano imballati densamente su un singolo circuito integrato, tuttavia che rimangono segregati fisicamente durante l'elaborazione per lotti successiva. Le proteine in covalenza sono state fissate ai pozzi usando un crosslinker 3-glycidoxypropyltrimethoxysilane (GPTS) (38).
Le molecole bloccate possono essere recuperate facilmente dai nanowells.  Una volta coperto di oro nei nanowells, è previsto che le analisi di risonanza del plasmon di spettrometria totale e della superficie di alto-rendimento possano essere effettuate.  Lo svantaggio più grande di questa tecnica è che specialzed l'apparecchiatura sia richiesto per caricare i nanowells ad alta densità (8.27). 

Dopo: Metodi del collegamento dell'anticorpo e della proteina - creazione di un circuito integrato di Microarray

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Introduzione e priorità bassa ai circuiti integrati della proteina ed ai circuiti integrati dell'anticorpo.

Riferimenti per proteina e l'anticorpo Microarrays