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DNA dei campioni e della mascherina di PCR

DNA della mascherina e campioni per PCR

Guida di riferimento per il DNA della mascherina e campioni per PCR:

Campioni di PCR:  Tipi, importo e purezza

Tipi di campioni per PCR

Il singolo o DNA double-stranded di tutta l'origine può essere un campione di PCR. Le mascherine che possono essere usate per l'amplificazione includono animale, batterico, la pianta, o virale. La conversione delle molecole del RNA, compreso RNA totale, di poli RNA (A+), di RNA virale, del tRNA, o del rRNA deve accadere prima dell'amplificazione quando usando questi mentre mascherine al cosiddetto DNA complementare (DNA) dal transcriptase di inverso degli enzimi (MuLV o polimerasi del rTth e recombinant del DNA).

Quantità di materiale per PCR

L'importo del prodotto base, richiesto per PCR può essere così piccolo come singola molecola.  Come base, fino agli importi del nanogram di DNA ha clonato la mascherina, fino agli importi di microgrammo di DNA genomic, o fino a 105 molecole dell'obiettivo del DNA sono la cosa migliore per la prova iniziale di PCR.

Purezza della mascherina e del campione per PCR

La purezza del campione del DNA che sarà usato per l'amplificazione di PCR non non deve essere alta. Una cellula, un lysate grezzo delle cellule, o persino un piccolo campione della mascherina degradata del DNA è solitamente sufficienti per l'amplificazione riuscita. I requisiti della purezza del campione devono essere che l'obiettivo contiene almeno un filo intatto del DNA che comprende la regione amplificata e che le impurità connesse con l'obiettivo sono diluite in modo da non inibire l'attività dell'enzima. Sia quello come può, per alcune amplificazioni, quale PCR lungo, esso può essere necessario da considerare la qualità e la quantità del campione del DNA. Per esempio: 1. Quando più molecole della mascherina sono disponibili, ci sono meno casi dei positives falsi causati tramite contaminazione trasversale fra i campioni o “contaminazione” di residuo dalle amplificazioni precedenti di PCR.

2. Quando le amplificazioni di PCR difetta della specificità o del risparmio di temi, o quando le sequenze dell'obiettivo sono limitate, ci è una probabilità più grande del rendimento inadeguato del prodotto.

3. Quando la frazione di iniziare il DNA disponibile a PCR è incerta, è sempre più difficile da determinare il soddisfare del DNA dell'obiettivo.