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Analisi dei prodotti di PCR

Analisi di elettroforesi del gel dell'agarosi dei prodotti di PCR

A rapidamente e facilmente analizzi e risolva i prodotti di PCR, un 3% NuSieve può essere l'agarosi usata di GTG (FMC Bioproducts, Rockland, ME) e gel dell'agarosi di 1% Seakem GTG (FMC Bioproducts) fatto funzionare in TBE (un Tris-borato da 89 millimetri, un EDTA da 2 millimetri) o in TAE (40 millimetri di Tris-acetato, un EDTA da 2 millimetri, pH approssimativamente 8.5). Le fasce risolte del DNA sono rilevate macchiando i gel con approssimativamente 0.5 μg/mL del bromuro di etidio, sono seguite destaining con acqua o verde® 1 di SYBR (Molecular Probes Inc., Eugene, O) ed infine sono fotografate sotto illuminazione UV. Usi una scaletta 123-basepair (B.P.) o 1-kilobasepair (kbp) come indicatore conveniente per le valutazioni di formato dei prodotti.

Altri metodi analitici per analizzare i prodotti di PCR

Ci è una varietà di altri metodi di rilevazione disponibili per analisi di prodotto di PCR, quale etidio bromuro-ha macchiato 8–gel di poliacrilammide di 10% fatti funzionare nell'amplificatore di TBE, gel del sud o dot/blots, subcloning ed ordinare diretto, analisi di HPLC e l'uso dei microplates 96-well, chiamare alcuni. Il d'inversione puntino-macchiano l'amplificazione dei combines PCR di metodo con rilevazione non radioattiva. L'introduzione delle tinture fluorescenti a PCR, insieme ad uno strumento adatto per quantificazione in tempo reale e in linea dei prodotti di PCR durante l'amplificazione ha condotto allo sviluppo di PCR cinetico o di PCR quantitativo. PCR quantitativo (QPC) misura l'accumulazione del prodotto di PCR durante la fase esponenziale della reazione e prima che l'amplificazione diventi vulnerabile, cioè, quando i reagenti sono limitati. Il prisma 7700 (biosistemi applicati) di ABI ed il LightCycler (prodotti biochimici molecolari di Roche, Mannheim, Germania) sono dispositivi fluorescenti integrati di rilevazione che permettono la fluorescenza che controlla continuamente o o una volta per il ciclo. Questi strumenti possono anche caratterizzare i prodotti di PCR dalle loro caratteristiche di fusione, per esempio, per discriminare le mutazioni di singlebase da un selvaggio-tipo sequenza. Il sistema quantitativo multiplo™ recentemente progettato di Mx4000 PCR (Strategene, La Jolla, CA) può generare ed analizzare i dati per le analisi fluorescenti multiple di tempo reale QPCR.