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Alberini Recenti Della Tribuna

Ordinare Di Maxam Gilbert

Come il DNA è ordinato

DNA che ordina usando il metodo di Maxam-Gilbert

Maxam-Gilbert che ordina con questo metodo di DNA che ordina invece di sintetizzazione del DNA in vitro ed arresto delle reazioni di sintesi con i terminali chain, questo metodo comincia con DNA integrale e estremità identificato e lo fende con i reagenti specifici bassi. Così come questo metodo funziona con le basi della guanina, ma lo stesso principio si applica a tutte e quattro le basi; In primo luogo estremità-identifichiamo un frammento che del DNA desideriamo ordinare.

Ciò può essere 5’- o 3’- conclude identificare. Dopo, modifichiamo un genere di base. Qui usiamo il solfato dimetilico (DMS) per metilare le guanine. (realmente, questo reagente egualmente metila i adenines, ma non in un modo quello conduce a fenditura del filo del DNA.) Come nel metodo chain di termine, non desideriamo interessare ogni guanina, o produrremo soltanto i frammenti molto piccoli che non permetteranno che noi determiniamo la sequenza’del DNA s. Di conseguenza, facciamo la metilazione nelle condizioni miti che conducono ad una media di soltanto una guanina metilata per il filo del DNA. Dopo, usiamo un reagente (piperidina) che fa due cose: causa la perdita della base metilata, allora esso rompe la base del DNA al luogo della base persa (il luogo apurinic). In questo caso, il G nel mezzo della sequenza è stato metilato, in modo da la rottura del filo ha accaduto là, producendo un trimero identificato.

In altra molecola del DNA, il primo G non potrebbe essere metilato, provocando un fosfato identificato (la base e lo zucchero sarebbero persi nelle fenditure chimiche). Per concludere, electrophorese i prodotti e le rileviamo da autoradiografia, appena come nel metodo di catena-termine. Naturalmente, dobbiamo fare funzionare altre tre reazioni che si fendono alle altre tre basi. Ci sono parecchi modi di fare questo. Per esempio, possiamo indebolire i legami del glicoside sia ad adenina che a guanina con acido; allora la piperidina causerà la rottura del filo e di depurination dopo entrambi come ed il Gs. Se electrophorese questo reazione di G + di A al lato della reazione di G soltanto, noi possiamo ottenere come tramite il confronto. Similmente, l'idrazina apre sia gli anelli della citosina che di thymine e la piperidina può allora rimuovere queste basi e rompere il filo del DNA ai luoghi risultanti di apyrumidine. In presenza del NaCl del 1M, l'idrazina è specifica per citosina soltanto, in modo da possiamo fare funzionare questa reazione vicino alla reazione di C+T ed ottenere gli st tramite il confronto.

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