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Coltura Batterica Delle Piastre Di Agar

Le informazioni sullo sviluppo delle colture batteriche per mezzo delle piastre della coltura dell'agar

Indice:

Piastra di agar e media dell'agar che effettuano un analisi guasti e soggetti della tribuna

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Che cosa è agar - definizione?

L'agar o l'agar-agar (da un significato malay "verdura" di parola), la sostanza che è usata nel preparare un genere di terreno di coltura solido per il lavoro batteriologico, è un pro condotto preparato dalle varie alghe trovate vicino all'Oceano Indiano ed in acque cinesi e giapponesi. Questo tipo di alga ha parecchi nomi comuni, come il muschio di Jaffna o del Ceylon, la colla di pesce del Bengala, ecc. Le varie specie sono usate per alimento ed il commercio è considerevole.

Priorità bassa e storia su microbiologia per mezzo del brodo e delle piastre nutrienti dell'agar

Payen, un -(about francese del chimico 1859), ha ottenuto la gelatina dell'agar dall'alga, corneum di Gelidium, nel seguente modo: All'alga è stata permessa levarsi in piedi per un certo tempo in una soluzione diluita fredda di acido cloridrico; l'acido è stato eliminato risciacquando parecchie volte con acqua, quindi l'alga è stata disposta in una soluzione diluita fredda di ammoniaca; dopo l'ammoniaca è stata eliminata dalla sciacquatura ripetuta con acqua fredda. Durante questo processo, l'alga ha perso 53% del relativo peso in sali minerali, nella materia di coloritura ed in costituenti organici. La parte restante è stata bollita in acqua, durante quale il processo la gelatina di verdure è stata estratta. La soluzione in modo da verificato è stata versata fuori, lasciante il sedimento inutile dietro. Questa gelatina è la stessa in composizione di che esistendo nei tessuti di verdure; non è stata cambiata chimicamente, come è collageno nella preparazione di gelatina. L'agar commerciale il più probabilmente è preparato volatilizzando questa soluzione allo stato secco attraverso i mezzi differenti.

L'agar entra solitamente nelle mani del bacteriologist come lungamente, strisce snelle e grayish-bianche, o come blocchi, o più specialmente negli ultimi anni, sotto forma d'un der grigio-bianco del prigioniero di guerra della fabbricazione europea.

L'agar, contrariamente a gelatina, è un carboidrato, cioè, consiste di una combinazione di carbonio, di idrogeno e di ossigeno soltanto. Le tracce di azoto sono presenti come impurità. Le suddette determinazioni qualitative dei relativi uents elementari del constit sono state fatte da Payen, da Parumbaru e da Hueppe, che ha fatto le loro determinazioni sull'agar dalle sorgenti differenti. Per quanto può essere accertato, la relativa formula empirica ancora non è stata studiata in alcuna misura.

Come gelatina, tuttavia, l'agar è un colloide rovesciabile. Si assorbisce in acqua fredda, si dissolve in acqua calda dopo un'ebollizione lunga ad una soluzione libera insipida ed inodora e nei ifies solidi sul raffreddamento più o a meno gelatina opaca. La relativa soluzione acquosa è neutra o quasi neutrale alla ftaleina del fenolo; eppure, una goccia o due del ventesimo idrato normale del sodio è sufficienti per rendere il colore dentellare percettibile.

Le proprietà colloidali dell'agar non sono distrutte da un heating lungo-continuato ad una temperatura elevata, né tramite l'azione dei microorganismi ordinari come sono quelli di gelatina. Le suddette proprietà, tuttavia, sono influenzate e possono essere alterate interamente dalla reazione del liquido in cui l'agar è dissolto.

La reazione del liquido, cioè, se è acida o alcalina, influenza l'agar quanto alla relativi solubilità, solidità, colore, acetato, filtrabilità e quantità di acqua di tion di condensa. Se l'agar è dissolto in un liquido di un'acidità equivalente a 0.1% HC1, l'agar si dissolve molto prontamente, filtra rapidamente, il filtrato risultante che è una soluzione giallo-chiaro, trasparente, sdrucciolevole, acquosa che non si solidifica sul raffreddamento. Se una percentuale più piccola di idro acido chloric è usata, la solidificazione accade (inferiore a 40 C.) ma la gelatina "non si leverà in piedi in su" ed è quindi inutile per le colture di tubo obliquo agarico o della piastra. Una grande quantità di acqua con di densation è presente egualmente.

Se l'agar è dissolto in un brodo alcalino o neutro debole, un liquido spesso, bruno-rossastro, viscoso è che filtra lentamente e si solidifica rapidamente a 40 C., ad una gelatina molto solida, opaca, asciutta, avere ottenuto ma poca acqua di condensazione; mantiene bene la relativa figura nelle inclinazioni ed in piastre. Così il valore dell'agar come terreno di coltura solido è sollevato o abbassato secondo il cjegree di alcalinità o dell'acidità.

Deve essere notato in più, tuttavia, che quando la proprietà solidificantesi dell'agar è distrutta una volta dalla presenza di un eccesso di acido nella relativa soluzione, questa proprietà può non essere riguadagnata mai da neutralizzazione con l'alcali; l'acido per manently distrugge la reversibilità del colloide.

Il melting-point dell'agar (di 1.5% nella soluzione neutra) è 97 C. ed anche se il relativo punto solidificantesi è a 40 C., quando una volta che si è solidificato esso si leverà in piedi in su nel termostato ad una temperatura di 50 C. Per gli scopi batteriologici, soltanto quella forma dell'agar può essere usata che rimane fluido a 38 a 40 C. Agar che rimane fluido soltanto ad una temperatura sopra questo punto sarebbe troppo caldo quando in un liquido dichiara per uso; la vitalità degli organismi introdotti sarebbe alterata o distrutto stata dalla temperatura elevata.

Vantaggi e svantaggi come agar come media nutrienti

Le difficoltà sono incontrate nella preparazione di un terreno di coltura solido dall'agar, dovuto la relative solubilità lenta, viscosità e filtrabilità lenta conseguente. La relativa soluzione (digestione) è effettuata, come accennato sopra, da un heating lungo in un bagno d'acqua, in uno sterilizzatore del vapore, in un autoclav, o in un'eccedenza una fiamma libera. La durata richiesta per digestione completa dipende da tre cose: La reazione del liquido in cui l'agar è dissolto, il contenuto di percento dell'agar ed il metodo di dissoluzione. L'influenza della reazione delle soluzioni dell'agar è stata trattata sopra. Per uso generale della coltura, tuttavia, l'agar ordinario è reso a scala più piena +15 (agar si solidifica con la difficoltà superiore alla scala più piena +30).

Un agar di un per cento è molto più facilmente sostanza solubile nelle circostanze identiche che un più alto percento. Un ed un percento mezzo è l'importo usato nei media ordinari dell'agar, dando una gelatina piuttosto più rigida e così più desiderabile.

L'agar è digerito il più velocemente sopra una fiamma libera. Se non riscaldato sufficientemente, dopo la filtrazione e la sterilizzazione dell'agar con il metodo intermittente, un itate fioccoso del precip compare frequentemente nel media precedentemente chiaro. Ciò può essere fatta per sparire nella maggior parte dei casi sottoponendo alla temperatura del autoclav (120 C. 15 Ibs.).

L'agar per i terreni di coltura dovrebbe essere interamente chiaro quando liquido ed in modo omogeneo opaco-traslucido quando solido; dovrebbe avere un translucence sufficiente per permettere le colonie profonde sulle piastre o sulle colture di stab da osservare prontamente; non dovrebbe contenere il materiale, il sedimento, o le parti fioccoso di cotone o della carta da filtro, come questi ostacolano lo sviluppo tipico della colonia dei microorganismi e, all'inesperto, possono determinate volte sbagliarsi le colonie.

Nei primi metodi usati mai per fare i terreni di coltura dell'agar, invece di filtrare l'agar caldo attraverso la carta da filtro, il cotone assorbente, o l'amianto, è stato permesso raffreddarsi, durante quale il processo il sedimento depositato alla parte inferiore; quando il solido il sedimento è stato tagliato. Questo metodo non era desiderabile, poichè la chiarezza dell'agar risultante dipenderebbe dal tasso di raffreddamento; più lento il raffreddamento, più completamente la sedimentazione avverrebbe.

 

L'agar non è un alimento per i microorganismi in generale, cioè, non è influenzato dagli enzimi digestivi della maggior parte dei batteri, come è gelatina. Tuttavia, alcuni batteri sono conosciuti che hanno l'potenza dell'agar di liquefazione, fra cui sono gli sp. di gelaticus n. del B. (gran) e Bad. Nenckii, entrambi cui sono trovati, come sarebbero previsti, in acqua di mare. Questa inerzia tive di compara dell'agar lo rende importante per la preparazione, dei media sintetici solidi, il valore di cui può essere en hanced sottoponendo l'agar commerciale alla fermentazione naturale durante il quale processo tutte le tracce delle sostanze in grado dell'alimento di profitto sono usate in su dai microorganismi presenti. (Beijerinck.)

L'agar è utile speciale nel lavoro batteriologico in cui la coltura dei microorganismi deve essere condotta ad una temperatura sopra il melting-point di gelatina. Questa caratteristica ha reso possibile i progressi grandi che sono stati presi in batteriologia medica, altretanti batteri patogeni può essere isolata e svilupparsi soltanto con la difficoltà ai tures di tempera sotto quello del corpo.

 

 

ESERCITAZIONE 9. PREPARAZIONE DELL'AGAR NUTRIENTE

Apparecchio. un secchio dei 3.5 agata-articoli di litro; 15 gms. Agar; 10 gms. Peptone; 5 gms. Sale; 10 gms. Albume dell'uovo (o un uovo); infusione sterile della carne di 500 c.c.; acqua di rubinetto di 500 c.c.; apparecchiatura di titolazione; NacOh N/20; NacOh Di N/l; ftaleina del fenolo (indicatore); acqua distillata; grande imbuto; carta da filtro intrecciata; imbuto riempientesi; provette sterili; pallone sterile di litro; equilibrii di massima; grande bruciatore a gas; una tazza di misurazione da 1 litro; apparecchio per la sterilizzazione del vapore.

Metodo. 1. Nei gms da 3 litri dell'agata degli articoli del posto 15 del secchio. Dell'agar in 500 c.c. dell'acqua di rubinetto.

2. Lavi bene l'agar, separando i brandelli ed il ing dello squeez esso tramite le mani.

3. Decanti l'acqua sporca, misurante l'importo versato

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MICROBIOLOGIA GENERALE

fuori di; sostituisca con la stessa quantità di acqua di rubinetto pulita.

Ripeti.

4. Dissolvasi sopra una fiamma e un boil liberi per cinque minuti, mescolantesi costantemente. Il tion di solu deve essere interamente esente dai grumi dell'agar.

5. Aggiunga il peptone di 1% Witte e 0.5% sali all'agar d'ebollizione.

6. A 500 c.c. di carne nella fusione aggiunga 10 gms. Di Al dell'uovo bumen che è stato mescolato bene con 100 c.c. dell'acqua di rubinetto. (messo l'albume dell'uovo in una chiavetta ed aggiunga abbastanza acqua per formare una colla. Mescolisi fino a liscio ed allora aggiunga l'acqua del ing di riman. Un uovo; pozzo battuto,

Fig. 9. L'imbuto dell'acqua calda per può sostituirsi.) Mescoli tutto l'agar o gelatina di filtrazione. Completamente

7. Versi lentamente la miscela fusa dell'agar nell'infusione della carne, mescolantesi costantemente. Calore nel autoclav a 120 C. per i minuti forty-five o per un'ora in vapore fluente.

Nota. Il momento per questo heating non può essere allungato a vantaggio, ma mai essere ridotto. Se l'agar non è stato riscaldato sufficientemente prima di filtrazione, un precipitato fioccoso formerà nei tubi sul riscaldamento in vapore fluente. Nella maggior parte dei casi questo può essere causato per sparire riscaldando per un breve periodo nel autoclav a 15 Ibs.

8. Titoli con NacOh N/20.

9. Registri la reazione del media a +15 con NacOh normale o HC1 normale. Retitrate e riadatta la reazione se necessario.

10. Il counterpoise e nota il peso.

11. Bolla quindici minuti sopra una fiamma libera, mescolantesi con stantly,

SOLUZIONE 43 DEL PEPTONE DEL DUNHAM

12. Counterpoise e componga tutta la perdita nel peso con acqua distillata d'ebollizione.

13. Filtri la carta da filtro intrecciata diretta calda d'ebollizione precedentemente lavata appena con acqua di ebollizione. Non passi il filtrato attraverso la stessa carta fino a che libero.

14. Provette sterili dei materiali di riempimento 60 - 70, usando circa 8 c.c. del media per ogni tubo.

15. Riscaldi in vapore fluente venti minuti tre giorni cessive del suc.

16. All'estremità del heating finale, disponga i tubi dell'agar in una posizione propensa per solidificarsi (non lasci che il media tocchi la spina) in modo che una grande superficie sia pre sented per la coltura dei microorganismi. Questi sono chiamati tubi obliqui agarici.

Nota. Se i tubi dell'agar devono essere usati soltanto per i tubi obliqui agarici, di meno del media è necessario nel tubo che quando devono essere usate per la placcatura.

17. Per sterilizzare una grande boccetta dell'agar, calore per trenta minuti quattro giorni successivi.

 

 

 

Riferimenti per la coltura batterica dell'agar

SMITH, ERWIN F.: Batteri rispetto alle malattie delle piante. Volume. I,

pp 31-36. Parecchie illustrazioni. SCHULTZ, N K.: Einiger Nahrsubstrate dello Zur Frage von der Bereitung.

Centesimo. F. Bakt. I. Orig., Bd. 10, 1891, p. 57.