Inibizione di PCR da DNA

[Dionisia]

CIAO TUTTI!

Ho un problema grande del pcr. Sto provando a condurre un pcr usando il DNA che del plasmide mi sono purificato usando un kit di Qiagen Midi.

Sto usando questo DNA per fare una curva standard per qRT-PCR.

La mia curva standard per il qRT-PCR consiste di una diluzione seriale del cinque-punto che varia da 10ng a 0.01ng di DNA in un volume di reazione 25uL.

Il mio problema è che non vedo amplificazione con gli più alti due punti sulla curva che è i punti 10ng e 1ng.

Non penso che i miei reagenti stiano limitando perché ho ottimizzato la reazione di PCR alle più alte concentrazioni che quelle sulla mia curva. Qualcosa sta inibendo la mia amplificazione di PCR nelle più alte concentrazioni nel DNA e perfino un rappresentante di Qiagen ha suggerito che il mio DNA può inibire PCR.
Chiunque ha de idee?
i ringraziamenti per i everyones aiutano in anticipo
acclamazioni

[postdock]

Hey là,

che amplificatore di eluizione avete usato, l'amplificatore di Qiagen eb?

Ci è sali ed EDTA in Qiagen eb che può causare la difficoltà di PCR.

Egualmente non si dimentichi che ci potrebbe essere etanolo residuo dal vostro miniprep che può inibire il risparmio di temi della reazione di PCR.