Estrazione del DNA di Arabidopsis dai fogli

[Aristotle]

Hey tipi,

posso ottenere un certo input su come estrarre il DNA dai fogli di Arabidopsis?

grazie

[yourlabdata]

Ho un buon protocollo che uso che è... unfortunatly relativo abbastanza rapido al uni in modo da dovrò inviarlo il lunedì per voi.

[danfive]

Qui è una procedura che ho seguito nel passato:

1. Pesi 0.1-0.2 grammi di tessuto (in pieno fogli trifoglie ~4) in tubo del microfuge 1.5ml. Freeze rapido e frantumazione da spolverizzare con il pestello blu - non lasci il disgelo
amplificatore di 2.Add 0.75ml eb
Amplificatore di eb: 100mM Tris pH8.0
EDTA pH8.0 di 50mM
NaCl di 500mM
10mM beta-Merc (aggiunga il beta-merc everytime fresco)
3. Continui a mescolare fino a buono mescolato e sciolto.
4. Aggiunga 0.05ml 20% SDS, agiti bene ed incubi i tubi a 65C 10min
5. Aggiunga l'acetato del potassio di 0.25ml 5M, agiti bene ed incubi i tubi su ghiaccio (0C) 20min. (conservazione su ghiaccio fino a tutti i campioni lysed).
tubi di 6.Spin a 21,000g per 20min
7.remove w/pipetman galleggiante (~1ml) e panno attraverso messo di mira nel nuovo tubo 1.5ml.
8. aggiunga l'isopropanolo 500ul, invertisca al pozzo della miscela ed incubi a -20C per 30min-1hr.
9. DNA della pallina a 21,000g per 15min -- versisi fuori delle palline galleggianti ed asciutte invertendo il tubo sul tovagliolo di carta per 5min.
10. Ridissolva le palline con 0.7ml TE (50mM Tris, EDTA pH8 di 10mM) agitando; la pallina assicurantesi è risospesa.
11. Fili il tubo a velocità massima affinchè 10min rimuovano i residui insolubili.
12. Trasferisca il galleggiante al nuovo tubo ed aggiunga l'acetato del sodio di 75ul 3M e l'isopropanolo 500ul.
13. Mescoli bene invertendo e fili per appallottolare il DNA per 30sec.
14. Lavi la pallina con 700ul 80% EtOH -- fili e rimuova EtOH, ~5min asciutto invertito sul tovagliolo di carta.
15. ridissolva in 100ul 10mM Tris, l'EDTA il pH 8.0 di 0.5mM.
16. Lasci per sedersi SOPRA a 4C.
17. Controlli OD260 e dilua per PCR (~1/100 o 5ng/ul).

Soluzioni.
750ul/sample -- Amplificatore Di Eb: 100mM Tris pH 8.0, EDTA pH 8.0, NaCl di 500mM, beta-mercaptoetanolo di 50mM di 10mM
50ul/sample -- 20%SDS
acetato del potassio di 250ul/sample---5M
700ul/sample---50mM Tris, EDTA pH 8.0 di 10mM
1mL/sample -- isopropanolo
75ul/sample -- 3M NaAcetate
700ul/sample -- 80% EtOH
100ul/sample -- 10mM Tris, EDTA pH 8.0 di 0.5mM

Materiali ed incubatrici.
Pestelli di plastica blu.
congelatore di -20C
bagno d'acqua 65C
frigorifero 4C
Ghiaccio 0C
spettrofotometro
Panno Di Mira

[yourlabdata]

La preparazione di edwards sembra a me essere molto più semplice... Utilizza 2 tubi 1.7ml ma il doesnt richiede tutte le soluzioni fresche.

Lo invierà ancora il lunedì per voi.

[yourlabdata]

Hi!

Per quelli di voi che mi hanno chiesto hanno inviato il protocollo qui:
Preparazioni di Edwards (metodo semplice e veloce di A per la preparazione del DNA genomic della pianta per analisi di PCR)

La versione del pdf di esso è disponibile qui:
Edwards Prepara il Pdf

Speranza aiuta qualcuno!