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FIACCHI Il Protocollo Della Fosfatasi Alcalina Del Gambero

La fosfatasi alcalina del gambero o FIACCA, è un enzima che catalizza la defosforilazione di 5’ fosfati dalle estremità dephosphorylating del RNA o del DNA dell'acido nucleico.

Si noti che i prodotti di PCR ed egualmente iniettori non hanno fosfatasi sulle loro estremità libere e quindi debba essere fosforilato prima di clonazione se state andando usare un vettore de-fosforilato!

FIACCHI è temperatura instabile sono quindi voi può disattivare facilmente questo enzima (confrontato a CIP!). FIACCHI è disattivato con incubazione del bagno d'acqua 65°C per 15 minuti.

Non ottenete virtualmente reazione. FIACCHI richiede almeno il MgCl2 di 10mM (ma l'attività dell'enzima ottimale della fosfatasi alcalina del gambero è al MgCl2 di 20-25mM) e funziona bene a pH 8.0.

Al pmol del dephosphorylate 1 delle estremità del DNA

Al pmol del dephosphorylate 1 delle estremità del DNA (2.5 ug di un plasmide dai 3 Kb), dato che a 1hr a 37°C ch'avete bisogno di:

0.1 unità di FIACCANO per 5'le sporgenze, 0.2 unità per smussato e 0.5 unità per l'eccedenza 3'appende.
L'enzima viene 1 unità per l'UL, così essere sicuro voi può usare le unità approx.0.5 per 2 ug.

PUNTE: FIACCHI l'enzima può essere aggiunto direttamente alla raccolta di limitazione! Così il procedimento intero compreso la digestione degli enzimi di limitazione, la defosforilazione, l'inattivazione di enzimi, il ligation o 5’ estremità-identificanti può essere realizzato in un singolo tubo appena aggiungendo i reagenti adatti. Ciò permetterà che salviate il tempo e siate efficienti!

L'Analisi guasti FIACCA La Fosfatasi Alcalina Del Gambero?

Discuta e domande dell'alberino a questo proposito nella tribuna della fosfatasi alcalina del gambero e della clonazione del DNA !

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