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Trasformazione del DNA

 

Trasformazione in batteri

Griffith ha posto il fondamento per l'identificazione di DNA come il materiale genetico in 1928 con i suoi esperimenti su trasformazione nel pneumococcus del batterio, ora conosciuta come lo streptococco pneumoniae.  Il selvaggio-tipo organismo è una cellula sferica circondata da una capsula rivestita mucosa.  Le cellule formano le grandi, colonie glistening, caratterizzate come regolari.  Queste cellule sono capace virulento di causare le infezioni mortali sull'iniezione nei mouse.  Certo sforzo del mutante dei pneumoniae dello S. ha perso la capacità di formare una capsula.  Di conseguenza, si sviluppa come piccole, colonie approssimative.  È più d'importanza avirulent poiché non ha cappotto protettivo, esso è inghiottito dalle cellule’di anima bianche ospite s prima che possa proliferare abbastanza per fare tutti i danni. L'individuazione chiave del lavoro’del Griffith s era che le colonie virulente calore-uccise di S.pneumoniae potrebbero trasformare le cellule avirulent a quelle virulente.  Nè i batteri virulenti calore-uccisi nè quei avirulent in tensione da soli hanno potuto causare un'infezione mortale.  Insieme, comunque erano mortali.  La caratteristica virulenta ha passato in qualche modo dalle cellule guasti a quelle in tensione e avirulent.  La trasformazione non era transitoria; la capacità di fare una capsula e quindi di uccidere gli animali ospite, conferiti una volta sui batteri avirulent, è stata passata ai loro discendenti come caratteristica ereditabile.  Cioè il gene per virulenza, mancante nelle cellule avirulent, è stato guadagnato in qualche modo durante la trasformazione.  Ciò ha significato che la sostanza di trasformazione nei batteri calore-uccisi era probabilmente il gene per virulenza in se.  La parte mancante del puzzle era la natura chimica della sostanza di trasformazione.

Avery, MacLeod e McCarty hanno fornito la parte mancante in 1944.  Hanno usato una prova di trasformazione simile a quella che Griffith ha introdotto.  In primo luogo, hanno rimosso la proteina dall'estratto con i solventi organici ed hanno trovato che l'estratto ancora ha trasformato.  Dopo, lo hanno sottoposto a digestione con i vari enzimi.  La tripsina ed il chymotrypsin, che distruggono la proteina, non hanno avuti effetto su trasformazione.  Nessuno hanno fatto la ribonucleasi, che degrada il RNA.  Questi esperimenti hanno eliminato la proteina o il RNA come il materiale di trasformazione.  D'altra parte, Avery ed i suoi colleghe hanno trovato che la desossiribonucleasi degli enzimi (dnasi), che analizza il DNA, ha distrutto l'abilità di trasformazione dell'estratto virulento delle cellule.  Questi risultati hanno indicato che la sostanza di trasformazione era in effetti DNA. L'analisi fisico-chimica diretta ha sostenuto l'ipotesi che la sostanza di trasformazione purificata era DNA.  Gli strumenti analitici Avery ed i suoi colleghe usati erano come seguendo:

  1. Ultracentrifugazione:  Hanno filato la sostanza di trasformazione in un'ultracentrifuga (una centrifuga molto ad alta velocità) per valutare il relativo formato.  Il materiale con attività di trasformazione sedimented velocemente (mosso velocemente verso la parte inferiore del tubo centrifugo), suggerendo molto un alto peso molecolare, caratteristico di DNA.
  2. Elettroforesi:  Hanno disposto l'agente di trasformazione in un campo elettrico per vedere quanto si è mosso velocemente.  L'attività di trasformazione ha avuta una mobilità relativamente alta, anche caratteristica di DNA a causa del relativo alto rapporto di charge/mass.
  3. Spettrofotometria di assorbimento ultravioletta: Hanno disposto una soluzione della sostanza di trasformazione in uno spettrofotometro per vedere che genere di luce ultravioletta è il più fortemente absorbd.  Il relativo spettro di assorbimento ha abbinato il DNA.  Cioè la luce che ha assorbito ha avuta il più fortemente una lunghezza d'onda di circa 260 nm, contrariamente a proteina, che assorbe al massimo a 280 nm.
  4. Analisi chimica elementare:  Ciò ha reso un rapporto medio di nitrogen/phosphorus di 1.67,  circa che cosa si prevedrebbe per DNA, che è ricco di entrambi gli elementi, ma abbassarsi notevolmente che il valore previsto per proteina, che è ricca di azoto ma di povero in fosforo.  Anche una contaminazione leggera della proteina avrebbe sollevato il rapporto di nitrogen/phosphorus.

 

 

 

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