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Frammenti del DNA Di Purificazione Dell'Agarosi

Stazione Molecolare Del Copyright 2007

Purificazione del frammento del DNA dal protocollo dell'agarosi

1. Faccia funzionare il DNA "sul gel dell'agarosi della fusione bassa".
2. Per i frammenti del DNA 600bp a 5kb use1%; Per 300- 700bp l'agarosi di uso 2%. Se dovete funzionare i più piccoli frammenti usano 2% "Nusieve" + 1% "basso si fondono".
3. Dopo che le fasce separino, visualizzi la fascia su una casella UV (minimizzi l'esposizione di DNA a UV)
4. Tagli la fascia fuori (non graffi il filtro UV sulla casella chiara!).
5. Aggiunga l'UL 100 dell'amplificatore di T.E. (10mM Tris-HCl pH EDTA di 1mM, di 7.6) alla fascia, lo schiacciamento, calore a 65oC per approssimativamente. 5 minuti, aggiungono 200l del fenolo, il vortice, il calore 65°C per 3 min., vortice.
6. Microfuge 5 minuti, rimuove supernant
7. Aggiunga 100 l di T.E. al fenolo, il vortice, il calore 65°C 3 min. di vortice
8. Microfuge, supernants dello stagno.
9. Estratto del cloroformio (approssimativamente 400 UL), microfuge 3 minuti.
10. Precipitato EtOH, aggiungente 1/10 di volume 3M Na0Ac, 2.5 volumi. EtOH.
11. -20°C 1-2+hrs; la rotazione 30 min., si asciuga giù, porta in su nel volume adatto 0.1X T.E.

Punte per purificazione del gel dell'agarosi del DNA

• Regoli la trasporto-lampadina alla lunghezza d'onda UV lunga (o all'a bassa potenza). Ciò è un modo grande minimizzare il tempo ed energia di esposizione UV del DNA. Ciò minimizzerà la mutagenesi UV del DNA.
• Cornice fuori tanto di agarosi dalla fascia come possibile senza eliminare DNA. Ciò aiuta nella contaminazione di minimizzazione dell'agarosi che aumenterà la purificazione del DNA.
• Se state ottenendo i kit commerciali di uso di problemi quale spin-columns.There sono alcuni kit eccellenti per estrarre il DNA se potete permetterseli. Questi includono i kit da Qiagen, dal sigma e da altre aziende.

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