Separazione dei due fili di doppia elica del DNA

Mentre i rapporti del G - C ed A - T in DNA dell'organismo sono fissi, il soddisfare di GASCROMATOGRAFIA (percentuale del G +C) può variare considerevolmente da un DNA a another.When ch'una soluzione del DNA è riscaldata abbastanza, le forze non-covalenti che tengono insieme i due fili si indeboliscono ed infine break.When questo accade, i due fili si sfasciano in un processo conosciuto come denaturazione del DNA, o la temperatura del DNA melting.The a cui i fili del DNA sono metà denaturata è chiamata la temperatura di fusione, o Tm. La quantità di separazione del filo, o di fusione, è misurata dalla capacità di assorbimento della soluzione del DNA agli acidi 260nm.Nucleic assorbe la luce a questa lunghezza d'onda a causa della struttura elettronica nelle loro basi, ma quando due fili di DNA vengono insieme, la prossimità vicina delle basi nei due fili estigue alcuno di questo absorbance.When i due fili separati, questa che estigue sparisce e gli aumenti 30%-40%.This di capacità di assorbimento è chiamato spostamento hyperchromic.
Il contenuto di GASCROMATOGRAFIA di DNA ha un effetto significativo sul relativo Tm.The più su soddisfare di GASCROMATOGRAFIA del DNA, più su il relativo Tm.Why se questo be?One della tenuta che delle forze i due fili di DNA insieme è legami dell'idrogeno della forma tre di accoppiamenti di GASCROMATOGRAFIA dell'idrogeno bonding.Also, mentre agli accoppiamenti ha soltanto basamenti di two.It da ragionare, quindi che due fili dei rich del DNA in G e C terranno l'un l'altro più strettamente di quelle di DNA-RICCO.
Il heating non è l'unico modo denaturare i solventi di DNA.Organic quali solfossido e formammide dimetilici, o l'alto pH, interrompere il bonding dell'idrogeno fra i fili del DNA e promuovere denaturation.Lowering che la concentrazione nel sale della soluzione del DNA egualmente aiuta la denaturazione rimuovendo gli ioni che proteggono le cariche negative sui due fili da una forza ionica bassa di another.At, le forze reciprocamente repulsive delle cariche negative è abbastanza forte denaturare il ar del DNA una temperatura relativamente insufficiente.

Il contenuto di GASCROMATOGRAFIA di DNA egualmente interessa la relativa densità.