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This Transfection site is your portal for all things related to the transfection of cells with DNA plasmid or vector, RNA whether siRNA or RNAi, or even recombinant protein. यह साइट अपने Transfection पोर्टल के लिए सभी बातों से संबंधित transfection की कोशिकाओं के डीएनए के साथ प्लाज्मिड या सदिश , कि क्या शाही सेना siRNA या आरएनएआई , या पुनः संयोजक प्रोटीन भी है . We provide you with all the background information, protocols for cell transfection, optimization and analysis steps, and cell transfection troubleshooting information to become the ultimate expert! हम सब के साथ आप प्रदान की पृष्ठभूमि के बारे में जानकारी , प्रोटोकॉल के लिए सेल transfection , अनुकूलन और विश्लेषण कदम है , और समस्या निवारण सेल transfection बनने के लिए जानकारी का अंतिम विशेषज्ञ !
Transfection describes the introduction of foreign material into eukaryotic cells using a virus vector or other means of transfer. Transfection वर्णन की शुरुआत के विदेशी सामग्री eukaryotic कोशिकाओं में वायरस एक सदिश का उपयोग कर या अन्य साधनों का अंतरण .
The term transfection for non-viral methods is most often used in reference to mammalian cells, while the term transformation is preferred to describe non-viral DNA transfer in bacteria and non-animal eukaryotic cells such as fungi, algae and plants. यह शब्द transfection के लिए गैर वायरल तरीकों का इस्तेमाल किया है सबसे अधिक बार संदर्भ में कोशिकाओं को स्तनधारी है , जबकि शब्द परिवर्तन पसंद है वर्णन करने के लिए गैर वायरल हस्तांतरण के डीएनए में बैक्टीरिया और गैर पशु eukaryotic कोशिकाओं जैसे कवक , शैवाल और पौधों .
Transfection of animal cells typically involves opening transient pores or 'holes' in the cell plasma membrane, to allow the uptake of material. Transfection पशु की कोशिकाओं आम तौर पर शामिल खोलने pores क्षणिक या ' छिद्र ' प्लाज्मा झिल्ली में सेल , की अनुमति देने के लिए सामग्री के uptake . Genetic material (such as supercoiled plasmid DNA or siRNA constructs), or even proteins such as antibodies, may be transfected. आनुवंशिक सामग्री ( जैसे supercoiled प्लास्मिड डीएनए या निर्मित siRNA ) , या इस तरह के प्रोटीन के रूप में भी एंटीबॉडी , transfected हो सकता है . In addition to electroporation, transfection can be carried out by mixing a cationic lipid with the material to produce liposomes, which fuse with the cell plasma membrane and deposit their cargo inside. इसके अतिरिक्त electroporation , transfection द्वारा किया जा सकता है मिश्रण के साथ एक cationic लिपिड liposomes सामग्री के उत्पादन के लिए है , जो फ्यूज के साथ सेल प्लाज्मा झिल्ली और उनके माल के भीतर जमा है .
The original meaning of transfection was 'infection by transformation', ie introduction of DNA (or RNA) from a eukaryote virus or bacteriophage into cells, resulting in an infection. मूल अर्थ था transfection ' संक्रमण द्वारा परिवर्तन ' , यानी शुरुआत के डीएनए ( या शाही सेना ) में से एक eukaryote कोशिकाओं में वायरस या जीवाणुभोजी है , जिसके परिणामस्वरूप एक संक्रमण है . Because the term transformation had another sense in animal cell biology (a genetic change allowing long-term propagation in culture, or acquisition of properties typical of cancer cells), the term transfection acquired, for animal cells, its present meaning of a change in cell properties caused by introduction of DNA. क्योंकि इस शब्द ने एक और परिवर्तन की भावना में पशु कोशिका जीव विज्ञान ( एक आनुवंशिक परिवर्तन की अनुमति दीर्घकालिक प्रसार में संस्कृति , या अर्जन के कैंसर की कोशिकाओं की विशिष्ट गुण ) , शब्द transfection हासिल है , पशुओं की कोशिकाओं के लिए , अपने वर्तमान अर्थ में परिवर्तन कोशिका गुणों के कारण डीएनए की शुरूआत है .
Transfection is a method by which experimental DNA may be put into a cultured mammalian cell. Transfection एक विधि है जिसके द्वारा प्रयोगात्मक डीएनए में रखा जा सकता है संवर्धित स्तनधारी कोशिका है . Such experiments are usually performed using cloned DNA containing coding sequences and control regions (promoters, etc) in order to test whether the DNA will be expressed. आमतौर पर इस तरह के प्रयोगों के प्रदर्शन का उपयोग कर रहे हैं जिसमें डीएनए क्लोन कोडन दृश्य और नियंत्रण के क्षेत्रों ( प्रमोटर आदि ) के लिए डीएनए परीक्षण किया जाएगा कि क्या व्यक्त की है . Since the cloned DNA may have been extensively modified (for example, protein binding sites on the promoter may have been altered or removed), transfection is often used to test whether a particular modification affects the function of a gene. क्लोन डीएनए के बाद से व्यापक परिवर्तन हो सकता है ( उदाहरण के लिए , प्रोटीन साइटों पर बाध्यकारी प्रमोटर बदल सकते हैं या हटा दिया गया है ) , transfection का परीक्षण करने के लिए प्रयोग किया जाता है कि क्या एक विशेष समारोह में संशोधन के एक जीन को प्रभावित करता है .
Transfection Diagram: Transfection चित्र :
The ability to synthesize RNA in the laboratory is critical to many techniques. शाही सेना की क्षमता synthesize प्रयोगशाला में कई तकनीकों को महत्वपूर्ण है . Radiolabeled and non-radiolabeled RNA probes are required for many protocols, and they can be synthesized easily in small scale in vitro transcription reactions allowing their use in blot hybridizations and nuclease protection assays. Radiolabeled और गैर radiolabeled शाही सेना के कई जांच के लिए आवश्यक हैं प्रोटोकॉल , और वे आसानी से किया जा सकता है संश्लेषित में लघु विट्रो प्रतिलेखन में अपनी प्रतिक्रियाओं में उपयोग की अनुमति धब्बा hybridizations और nuclease संरक्षण assays .
In vitro transcription requires a purified linear DNA template containing a promoter, ribonucleotide triphosphates, a buffer system that includes DTT and magnesium विट्रो प्रतिलेखन में एक शुद्ध रैखिक डीएनए टेम्पलेट की आवश्यकता होती है जिसमें एक प्रमोटर , ribonucleotide triphosphates , एक बफर प्रणाली शामिल है कि DTT और मैग्नीशियम
In vitro transcription requires a purified linear DNA template containing a promoter, ribonucleotide triphosphates, a buffer system that includes DTT and magnesium विट्रो प्रतिलेखन में एक शुद्ध रैखिक डीएनए टेम्पलेट की आवश्यकता होती है जिसमें एक प्रमोटर , ribonucleotide triphosphates , एक बफर प्रणाली शामिल है कि DTT और मैग्नीशियम
There are various methods of introducing foreign DNA into a eukaryotic cell. इसके विभिन्न तरीकों के शुरू में एक विदेशी डीएनए eukaryotic कोशिका है . Many materials have been used as carriers for transfection, which can be divided into three kinds: (cationic) polymers, liposomes and nanoparticles. कई पदार्थों के लिए किया गया है transfection वाहक के रूप में प्रयोग किया जाता है , जो तीन प्रकार में विभाजित किया जा सकता है : ( cationic ) polymers , और liposomes नैनोकणों .
One of the cheapest (and least reliable) methods is transfection by calcium phosphate, originally discovered by FL Graham and AJ van der Eb in 1973[citation needed] (see also [1]). एक सबसे सस्ता ( और कम से कम विश्वसनीय ) विधियों द्वारा transfection है फॉस्फेट कैल्शियम , FL ग्राहम द्वारा मूल खोज की और 1973 में AJ वैन der Eb [ दृष्टान्त की जरूरत ] ( देखें भी [ 1 ] ) . HEPES-buffered saline solution (HeBS) containing phosphate ions is combined with a calcium chloride solution containing the DNA to be transfected. HEPES - buffered खार समाधान ( HeBS ) के साथ एक संयुक्त फॉस्फेट आयनों है जिसमें कैल्शियम क्लोराइड के समाधान के लिए डीएनए transfected . When the two are combined, a fine precipitate of the positively charged calcium and the negatively charged phosphate will form, binding the DNA to be transfected on its surface. जब दोनों संयुक्त रहे हैं , एक अच्छा precipitate के सकारात्मक और नकारात्मक कैल्शियम शुल्क लिया जाएगा फॉस्फेट फार्म का आरोप लगाया है , बाध्यकारी के डीएनए को उसकी सतह पर transfected . The suspension of the precipitate is then added to the cells to be transfected (usually a cell culture grown in a monolayer). इस निलंबन के precipitate है कोशिकाओं को फिर जोड़ा जा transfected ( आमतौर पर एक सेल में एक संस्कृति विकसित monolayer ) . By a process not entirely understood, the cells take up some of the precipitate, and with it, the DNA. यह प्रक्रिया पूरी तरह से समझा नहीं , शुरू के कुछ कोशिकाओं के precipitate है , और साथ में , डीएनए .
Other methods use highly branched organic compounds, so-called dendrimers, to bind the DNA and get it into the cell. अन्य विधियों का प्रयोग बहुत नीम कार्बनिक यौगिक , तथाकथित dendrimers , और प्राप्त करने के लिए बाध्य के डीएनए में यह कोशिका है . A very efficient method is the inclusion of the DNA to be transfected in liposomes, ie small, membrane-bounded bodies that are in some ways similar to the structure of a cell and can actually fuse with the cell membrane, releasing the DNA into the cell. एक बहुत ही कुशल है पद्धति शामिल किए जाने के डीएनए transfected में liposomes , यानी छोटी , झिल्ली से घिरे रहे हैं कि शरीर में कुछ इसी तरह के तरीकों की संरचना करने के लिए कर सकते हैं और वास्तव में एक सेल के साथ मिलाना सेल झिल्ली , जारी कोशिका के डीएनए में . For eukaryotic cells, lipid-cation based transfection is more typically used, because the cells are more sensitive. eukaryotic कोशिकाओं के लिए , लिपिड - cation आधारित transfection आमतौर अधिक प्रयोग किया जाता है , क्योंकि कोशिकाओं के प्रति अधिक संवेदनशील हैं .
Another method is the use of cationic polymers such as DEAE-dextran or polyethylenimine. एक अन्य विधि के प्रयोग के cationic polymers जैसे DEAE - dextran या polyethylenimine . The negatively charged DNA binds to the polycation and the complex is taken up by the cell via endocytosis. यह नकारात्मक का आरोप डीएनए को बांधे polycation जटिल है और सेल के द्वारा शुरू किया endocytosis .
A direct approach to transfection is the gene gun, where the DNA is coupled to a nanoparticle of an inert solid (commonly gold) which is then "shot" directly into the target cell's nucleus. प्रत्यक्ष दृष्टिकोण transfection एक जीन की बंदूक है , जहां एक डीएनए है युग्मित nanoparticle एक ठोस अक्रिय ( सामान्य सोने की ) है जो कि फिर " शॉट " सीधे कोशिका का नाभिक के लक्ष्य है . DNA can also be introduced into cells using viruses as a carrier. डीएनए भी किया जा सकता है शुरू की कोशिकाओं में वायरस का उपयोग कर के रूप में वाहक है . In such cases, the technique is called viral transduction, and, the cells are said to be transduced. ऐसे मामलों में , इस तकनीक से वायरल transduction कहा जाता है , और , कोशिकाओं को कहा transduced हैं .
Other methods of transfection include nucleofection, electroporation, heat shock, magnetofection and proprietary transfection reagents such as Lipofectamine, Dojindo Hilymax, Fugene, jetPEI, Effectene or DreamFect. अन्य विधियों के transfection शामिल nucleofection , electroporation , गर्मी आघात , magnetofection और स्वामित्व transfection अभिकर्मकों जैसे Lipofectamine , Dojindo Hilymax , Fugene , jetPEI , Effectene या DreamFect .
For most applications of transfection, it is sufficient if the transfected gene is only transiently expressed. सबसे transfection अनुप्रयोगों के लिए , यह पर्याप्त है तो केवल transfected जीन transiently व्यक्त की है . Since the DNA introduced in the transfection process is usually not inserted into the nuclear genome, the foreign DNA is lost at the later stage when the cells undergo mitosis. डीएनए के बाद से शुरू की प्रक्रिया में transfection नहीं है आमतौर पर परमाणु जीनोम में डाला जाता है , विदेशी डीएनए के बाद के चरण में है पर खो दिया जब कोशिकाओं के mitosis . If it is desired that the transfected gene actually remains in the genome of the cell and its daughter cells, a stable transfection must occur. यदि यह अपेक्षित है कि वास्तव में रहता है transfected जीन में जीनोम की कोशिकाओं सेल और उसकी बेटी , एक स्थिर transfection होने चाहिए .
To accomplish this, another gene is co-transfected, which gives the cell some selection advantage, such as resistance towards a certain toxin. यह करने के लिए एक और जीन सह transfected है , जो कुछ सेल के चयन का लाभ देता है , जैसे कि एक निश्चित प्रतिरोध की दिशा में विष है . Some (very few) of the transfected cells will, by chance, have inserted the foreign genetic material into their genome. कुछ ( बहुत कम है ) की कोशिकाओं transfected होगा , मौका , विदेशी डाला में अपनी आनुवंशिक सामग्री के जीनोम . If the toxin, towards which the co-transfected gene offers resistance, is then added to the cell culture, only those few cells with the foreign genes inserted into their genome will be able to proliferate, while other cells will die. यदि विष है , की दिशा में जो जीन के सह transfected प्रतिरोध प्रदान करता है , फिर जोड़ दिया है सेल संस्कृति , केवल उन कोशिकाओं के साथ कुछ विदेशी जीन में डाला जाता उनके जीनोम proliferate करने में सक्षम होंगे , जबकि अन्य कोशिकाओं मर जाएगा . After applying this selection pressure for some time, only the cells with a stable transfection remain and can be cultivated further. इस दबाव के चयन के बाद लागू करने में कुछ समय के लिए , केवल कोशिकाओं के साथ एक स्थिर रहने transfection और खेती की जा सकती है और आगे है .
A common agent for stable transfection is Geneticin, also known as G418, which is a toxin that can be neutralized by the product of the neomycin resistant gene. आम के एक एजेंट के लिए स्थिर transfection है Geneticin , G418 से भी जाना जाता है , जो एक विष neutralized द्वारा किया जा सकता है कि उत्पाद के neomycin प्रतिरोधी जीन है .
In vitro transcription requires a purified linear DNA template containing a promoter, ribonucleotide triphosphates, a buffer system that includes DTT and magnesium विट्रो प्रतिलेखन में एक शुद्ध रैखिक डीएनए टेम्पलेट की आवश्यकता होती है जिसमें एक प्रमोटर , ribonucleotide triphosphates , एक बफर प्रणाली शामिल है कि DTT और मैग्नीशियम
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