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Real-time PCR भू समय पीसीआर

Real time and Quantitative PCR वास्तविक समय और मात्रात्मक पीसीआर

Introduction to Real-Time PCR परिचय वास्तविक समय पीसीआर

Real-time PCR is a type of quantitative PCR which measures the amount of cDNA or mRNA in a sample, either from a population of cells (tissue or cell culture), or recently even from a single cell. Real-time is used commonly to determine the expression of a gene's mRNA, and its expression levels (copy number of mRNA) during certain conditions (such as treating cells with a drug).  Real-time PCR can be used to compare normal (control) samples to disease samples, giving an idea as to expression changes which occur with pathogenesis.  Real-time PCR due to its sensitivity is also used in the detection of pathogens in the blood such as viruses. भू समय पीसीआर का एक प्रकार है जो मात्रात्मक पीसीआर उपायों की राशि का या mRNA सीडीएनए में एक नमूना , या तो एक से कोशिकाओं की आबादी ( ऊतक या संस्कृति सेल ) , या हाल ही में एक एकल कोशिका से भी है . रियल बार सामान्य करने के लिए प्रयोग किया जाता है निर्धारित की अभिव्यक्ति का एक जीन की mRNA , और उसकी अभिव्यक्ति का स्तर ( प्रति संख्या में mRNA ) के दौरान कतिपय शर्तों के ( जैसे कि एक दवा के उपचार कोशिकाओं के साथ ) . रियल समय पीसीआर सामान्य की तुलना करने के लिए प्रयोग किया जा सकता है ( नियंत्रण ) के नमूनों को बीमारी के नमूने , दे एक विचार के रूप में परिवर्तन करने की अभिव्यक्ति होती है जो रोगजनन के साथ है . रियल समय पीसीआर के कारण अपनी संवेदनशीलता का पता लगाने में भी इस्तेमाल किया जाता है रोगजनकों के रक्त में इस तरह के वायरस के रूप में .

The development of real-time quantitative PCR has eliminated the variability traditionally associated with quantitative PCR, thus allowing the इस विकास के वास्तविक समय मात्रात्मक पीसीआर का सफाया कर दिया गया है परिवर्तनशीलता के साथ जुड़े पारंपरिक मात्रात्मक पीसीआर , इस प्रकार की अनुमति
routine and reliable quantitation of PCR products. नियमित और विश्वसनीय quantitation पीसीआर उत्पादों की है .

Table of Contents टेबल के अनुक्रमणिका

Introduction to Real-time PCR परिचय रियल समय पीसीआर

Real Time PCR: Advantages of Real-time PCR वास्तविक समय पीसीआर : फ़ायदे के वास्तविक समय पीसीआर

History of Real-Time PCR इतिहास के वास्तविक समय पीसीआर

Real-time PCR systems Available भू समय पीसीआर प्रणालियों को मारा

Real-time PCR Protocols भू समय पीसीआर प्रोटोकॉल

Mechanism of Real-time PCR प्रणाली के रियल समय पीसीआर

Real Time PCR: Advantages of Real-time PCR वास्तविक समय पीसीआर : फ़ायदे के वास्तविक समय पीसीआर

Each cell type expressess a set of mRNA molecules, known as a transcriptome.  In response to stimuli, cells are able to up-regulate or down-regulate factors such as protein enzymes inside the cell by regulating the mRNA levels of these factors.  mRNA levels are not always correlated with protein levels so some caution is necessary, however generally mRNA levels do loosely correspond to protein levels.  Measuring the mRNA levels of certain factors inside a cell using real-time pcr is a method which will give clues as to the amounts of these factors or proteins. प्रत्येक कोशिका expressess प्रकार का एक सेट mRNA अणु , एक transcriptome के नाम से जाना जाता है . सुनने की प्रतिक्रिया में , कोशिकाओं को विनियमित करने में सक्षम हैं या कम तक के विनियमन के कारक के रूप में इस तरह के प्रोटीन एन्ज़ाइम्स के भीतर सेल द्वारा विनियमित करने के mRNA इन कारकों के स्तर पर है . mRNA स्तर हमेशा से संबंधित नहीं हैं प्रोटीन का स्तर इतना कुछ सावधानी के साथ आवश्यक है , लेकिन आम तौर पर लचर mRNA का स्तर क्या प्रोटीन का स्तर से संबंधित हैं . mRNA का स्तर मापने के कुछ कारकों के भीतर एक कोशिका का उपयोग करते हुए पीसीआर वास्तविक समय एक विधि है जो देगा सूत्र के रूप में की मात्रा इन कारकों के या प्रोटीन है .

Traditionally, mRNA levels inside the cell were measured using Northern blotting.  This technique is regarded as a gold-standard in the measurement of gene expression/mRNA levels as it uses radiolabeled probe to label the RNA, which is then quantified using a scintillation counter giving very accurate readings. परंपरागत रूप से , mRNA स्तर नापा गया कोशिका का उपयोग करने के भीतर उत्तरी सोख्ता . इस तकनीक माना जाता है मानक में सोने का एक माप के जीन की अभिव्यक्ति / mRNA स्तर का उपयोग करता है क्योंकि यह radiolabeled शाही सेना की जांच करने के लिए लेबल है , जो मात्रा निर्धारित की है तो एक का उपयोग कर देने के काउंटर जगमगाहट बहुत ही सटीक रीडिंग्स . Northern blotting although very accurate had several disadvantages including the use of radioactivity. उत्तरी सोख्ता हालांकि बहुत ही सटीक था सहित कई नुकसान के प्रयोग के रेडियोधर्मिता . Northern blotting required the accurate measurement of mRNA and total RNA from cells extracted in order to compare samples. उत्तरी सोख्ता सही माप की आवश्यकता है और कुल mRNA शाही सेना से निकाला कोशिकाओं में तुलना करने के लिए नमूने हैं . This was a problem because although detection methods were very accurate, error could be introduced into Northern blotting (or RNA dot/slot blotting) through differences in total RNA/mRNA levels between samples (ie cell treatments, different tissues, different animals, etc.).  It also required relatively large amounts of RNA which required large numbers of cells. हालांकि यह एक समस्या है क्योंकि बहुत सही तरीकों का पता लगाने , त्रुटि उत्तरी सोख्ता में शुरू किया जा सकता है ( या शाही सेना डॉट / स्लॉट सोख्ता ) के माध्यम से कुल शाही सेना में अंतर / mRNA स्तर के नमूनों के बीच ( यानी सेल उपचार , विभिन्न ऊतकों , विभिन्न पशु आदि ) . इससे यह भी आवश्यक है अपेक्षाकृत बड़ी मात्रा में शाही सेना की आवश्यकता है जो कोशिकाओं की संख्या में है . Recently, mRNA gene quantification or real-time pcr methods have been improved and are easier to perform and do not require the use of radioactivity.  Researchers often only have access to small amounts of cells especially in the fields of stem cell research and primary cell research, and real-time pcr has made it possible to quantify mRNA levels from even very small numbers of cells and lately even single cells.  However, this extreme sensitivity of real-time pcr methods makes it vital to protect one's samples from contamination, which would lead to false results. हाल ही में , mRNA जीन quantification या वास्तविक समय पीसीआर तरीकों में सुधार किया गया है और आसान कर रहे हैं और प्रदर्शन करने के उपयोग की आवश्यकता नहीं है रेडियोधर्मिता . शोधकर्ताओं अक्सर केवल पर पहुँच हो , छोटी मात्रा में विशेष रूप से कोशिकाओं के क्षेत्रों में स्टेम कोशिका अनुसंधान और प्राथमिक कोशिका अनुसंधान , और वास्तविक समय पीसीआर ने संभव quantify mRNA स्तर से कोशिकाओं की संख्या भी बहुत कम है और हाल ही कोशिकाओं को भी है . हालांकि , इस अत्यधिक संवेदनशीलता के वास्तविक समय बनाता है पीसीआर विधियों को बचाने के लिए एक महत्वपूर्ण संदूषण के नमूनों में से है , जो होगा नेतृत्व करने के लिए झूठे परिणाम है . Current real-time pcr methods and systems also do not require the measurement of mRNA or cDNA sample concentrations before real-time pcr is conducted. वर्तमान वास्तविक समय पीसीआर विधियों और प्रणालियों की भी आवश्यकता नहीं है माप या mRNA सीडीएनए नमूना सांद्रता वास्तविक समय से पहले आयोजित पीसीआर है .

History of Real-Time PCR इतिहास के वास्तविक समय पीसीआर

Higuchi et al.1,2 pioneered the analysis of PCR kinetics by constructing a system that detects PCR products as Higuchi एट al.1 , 2 आरयू पीसीआर kinetics के विश्लेषण के द्वारा एक ऐसी प्रणाली का निर्माण का पता लगाता है कि पीसीआर उत्पादों के रूप में
they accumulate. वे संचित है . This “real-time” system includes the intercalator ethidium bromide in each amplification reaction, यह " वास्तविक समय " प्रणाली शामिल है intercalator ethidium ब्रोमाइड प्रत्येक प्रवर्धन प्रतिक्रिया में ,
an adapted thermal cycler to irradiate the samples with ultraviolet light, and detection of the resulting fluorescence अनुकूलित करने के लिए एक थर्मल cycler चमकाना के नमूनों के साथ अल्ट्रावायलेट प्रकाश , और पता लगाने के परिणामस्वरूप प्रतिदीप्ति
with a computer-controlled cooled CCD camera. के साथ एक कंप्यूटर नियंत्रित ठंडे सीसीडी कैमरा है . Amplification produces increasing amounts of double-stranded प्रवर्धन मात्रा में उत्पादन बढ़ाने की दोहरी असहाय
DNA, which binds ethidium bromide, resulting in an increase in fluorescence. डीएनए है , जो बांधे ethidium ब्रोमाइड है , जिसके परिणामस्वरूप में वृद्धि प्रतिदीप्ति . By plotting the increase in fluorescence आलेखन में वृद्धि करके प्रतिदीप्ति
versus cycle number, the system produces amplification plots that provide a more complete picture of the बनाम संख्या चक्र , सिस्टम का उत्पादन प्रवर्धन कथानक है कि एक अधिक प्रदान की पूरी तस्वीर
PCR process than assaying product accumulation after a fixed number of cycles. पीसीआर प्रक्रिया assaying उत्पाद की तुलना में संचय के बाद एक निर्धारित संख्या में चक्र है .

External sites: see Real Time PCR at Real Time PCR Info! विदेश स्थल : देखने के वास्तविक समय पीसीआर पर वास्तविक समय पीसीआर जानकारी !

References for Real-Time PCR संदर्भ के लिए वास्तविक समय पीसीआर

1. 1 . Higuchi, R., Dollinger, G., Walsh, PS, and Griffith, R. 1992. Higuchi , आर , Dollinger , जी , Walsh , पी एस , और ग्रि फ़ि थ , 1992 आर . Simultaneous amplification and detection of specific DNA sequences. प्रवर्धन का पता लगाने के साथ और विशेष दृश्य डीएनए .
Biotechnology 10:413–417. जैव प्रौद्योगिकी 10:413-417 .

2. 2 . Higuchi, R., Fockler, C., Dollinger, G., and Watson, R. 1993. Higuchi , आर , Fockler , सी , Dollinger , जी , और वाटसन , 1993 आर . Kinetic PCR: Real time monitoring of DNA amplification reactions. काइनेटिक पीसीआर : वास्तविक समय की निगरानी के डीएनए प्रवर्धन प्रतिक्रियाओं .
Biotechnology 11:1026–1030. जैव प्रौद्योगिकी 11:1026-1030 .

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